吴赞艺，林 旎，林梨平，欧启水，林东红，陈 敏，徐建萍



应用RNAi技术探讨CAP10基因在新型隐球菌感染小鼠中对Th1-Th2型免疫的影响

吴赞艺1，林 旎2，林梨平2，欧启水1，林东红2，陈 敏2，徐建萍2

目的 设计siRNA表达质粒干扰CAP10基因的合成，将siRNA干扰前与干扰后的新型隐球菌菌液经呼吸道感染小鼠分别建立动物模型，行组织病理学检查与细胞因子检测，探讨CAP10基因对Th1/Th2 免疫应答的影响。方法 建立小鼠吸入感染隐球菌模型，在感染后第7 d(急性期)，PAS染色观察小鼠肺组织病理变化，并采用酶联免疫吸附试验定量检测小鼠血液中的Th1(IFN-γ、TNF-α)、Th2细胞因子(IL-10)水平。结果 急性期小鼠血液内IFN-γ、TNF-α及IL-10浓度测定分别为：对照组(uninfected组)(19.24±1.31)pg/mL，(36.94±2.04)pg/mL及(18.32±3.00)pg/mL，新型隐球菌未干扰组(WT组)(14.34±1.26)pg/mL，(25.37±1.37)pg/mL及(72.96±8.83)pg/mL，新型隐球菌干扰组(siRNA-CAP10组)(14.63±0.95)pg/mL，(26.22±1.55)pg/mL及(38.73±4.61)pg/mL。与对照组相比，WT组和siRNA-CAP10组Th1因子IFN-γ及TNF-α水平明显降低(P<0.01)，Th2细胞因子IL-10水平明显增高。WT组与siRNA-CAP10组相比，IFN-γ及TNF-α水平未见明显增高而IL-10水平明显增高(P<0.01)。IFN-γ/IL-10及TNF-α/IL-10的比率分别为：对照组1.08±0.21，2.07±0.34，WT组0.20±0.03，0.35±0.05，siRNA-CAP10组0.38±0.04，0.69±0.09。WT组和siRNA-CAP10组IFN-γ/IL-10及TNF-α/IL-10的比率较对照组明显减少(P<0.01)；WT组IFN-γ/IL-10及TNF-α/IL-10的比率亦明显低于siRNA-CAP10组(P<0.01)。结论 在新型隐球菌感染小鼠中，CAP10基因的表达与抗真菌的免疫反应有关，其下调有利于控制新型隐球菌播散，有利于Th1/Th2比率趋于平衡，在调节炎症反应方面有重要作用，有望成为新的分子治疗靶点。

新型隐球菌；CAP10基因；siRNA；Th1 Th2 细胞因子

新型隐球菌是临床上重要的病原性真菌，具有显著的嗜神经性，能导致严重的隐球菌性脑膜炎，症状重、预后差、死亡率高。其发生、发展、转归除了宿主免疫状态的影响，还取决于多种毒力因子，如多糖荚膜、漆酶、脲酶、黑色素等的表达差异，其中高分子量的多聚糖荚膜是最经典的毒力因子，然而关于荚膜毒力因子与Th1/Th2 免疫应答的关系，以及在隐球菌病的病理生理过程中的作用尚不明朗[1-2]。

CAP10基因是荚膜形成的关键基因，有研究表明，野生型的新型隐球菌中敲除CAP10基因可以导致荚膜丢失，且在动物模型中无致病性，但重新与CAP10基因互补后菌株形成荚膜，并在动物模型中具有毒性[3]。……