孙　巍

（多多药业有限公司，黑龙江佳木斯154007）

HPLC法测定石杉碱甲分散片的含量

孙巍

（多多药业有限公司，黑龙江佳木斯154007）

通过对石杉碱甲分散片的含量方法学研究，建立石杉碱甲新剂型分散片含量的HPLC测定方法。

HPLC；石杉碱甲；分散片；含量测定

石杉碱甲[（-）-Huperzine，HupA]是我国科学家刘嘉森于1986年从草药千层塔（蛇足石杉）中分离得到的一种新型石松类生物碱有效单体，因其具有强效、高选择性的抗乙酞胆碱醋酶活性，已引起世界各国科学家的广泛关注，成为药学界受人瞩目的研究热点之一[1]。国内HupA片剂“哈伯因”于1994年上市，首先用于治疗阿尔茨海默病。与FDA批准的同类药物相比，HupA的化学结构独特，极高地选择性抑制脑内乙酰胆碱脂酶，可增强脑内胆碱神经元的功能。此外，该药还具有作用时间长、易透过血脑屏障、口服生物利用度高以及不良反应少等优点，优于加兰他敏、多奈哌齐和他克林等[1-2]。本文简要叙述了石杉碱甲的新剂型分散片中HPLC法测定含量的研究。

1　仪器与试剂

高效液相色谱仪（Agilent 1100系列）；分析天平（Sartorius BP211D）；超声波仪（天津恒奥HS3120）；色谱柱（Agilent ZORBAX SB-C18 5μm 4.6*150mm）。甲醇（德国MERCK公司HPLC级）；三乙醇胺（常熟市第二化工厂，AR）；石杉碱甲对照品（中检院，批号100243-201202）；超纯水（Milli-Q）。

2　色谱条件

参考石杉碱甲的化学结构特点及相关标准，采用甲醇∶水∶三乙醇胺=45∶55∶0.02体系作为流动相，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以水为溶剂，检测波长为310nm，温度为室温，能够对样品很好的分离分析。

3　测定方法

取本品的细粉适量（约相当于石杉碱甲0.05mg），置于10mL容量瓶中，加流动相适量，超声使石杉碱甲溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。按照上述色谱条件，精密量取50μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取石杉碱甲对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释成每1mL约含5μg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中的C15H18N2O含量[3]。

4　色谱系统适应性试验

按照上述色谱条件，取供试品溶液50μL注入液相色谱仪，记录色谱图，理论塔板数按石杉碱甲峰计算不低于2000，与其它杂质分离度不低于2.0，见表1。

表1　色谱系统适应性试验

试验表明，色谱系统适应性良好。

5　含量测定方法验证

5.1专属性试验

按中国药典（三、专属性要求）[4]，分别进行辅料的干扰试验。样品和辅料通过氧化、强酸、强碱、加热、光照等破坏试验产生降解产物后进行干扰试验，按含量测定方法检测主成分，结果表明，理论塔板数按石杉碱甲峰计算均不低于1500，石杉碱甲峰与其它经破坏产生的降解产物色谱峰分离度均大于1.5，表明在本色谱系统条件下，降解产物对测定无干扰，专属性较好。

5.2溶液稳定性试验

取测定法项下配制的对照品溶液及供试品溶液，室温下放置0、2、4、6、8、10、12h，分别取50μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测量石杉碱甲峰面积，计算RSD，结果见表2。

表2　溶液稳定性试验

试验结果表明，在12h内，本品对照品溶液及供试品溶液均能保持稳定。

5.3线性试验

精密称取石杉碱甲对照品适量，按中国药典（六、线性）所述要求[4]，测量石杉碱甲的峰面积A，以浓度C对峰面积A进行线性回归，结果见表3，回归曲线见图1。

表3　石杉碱甲线性试验

图1　含量测定回归曲线

结果表明，石杉碱甲在2.352～9.152μg/mL，范围内呈良好线性。

5.4灵敏度试验

精密称取石杉碱甲适量，加流动相配制成每1mL含石杉碱甲5.237μg的溶液，将该溶液加流动相逐步稀释配制系列溶液，分别取50μL注入液相色谱仪，记录色谱图，信噪比为2∶1时，测得石杉碱甲最低检测限浓度为0.02272μg/mL，最低检出量为1.136ng，信噪比为10∶1时，石杉碱甲最低定量浓度为0.1021μg/mL，最低定量限为5.105ng。

5.5回收率试验

精密称取对照品加入按处方配比的辅料制成每1mL中含石杉碱甲4μg、5μg、6μg溶液各10mL，取续滤液为供试品溶液，按照含量测定项下方法检测，结果见表4。

表4　石杉碱甲回收率测定

试验测得平均回收率为100.84%，RSD为0.74%，表明回收率良好。

5.6精密度试验

按含量测定方法及中国药典（二、精密度）要求[4]，分别进行连续进样精密度试验、重复性试验、中间精密度试验，结果见表5、表6、表7。

表5　连续进样精密度试验

表6　含量测定重复性试验

表7　含量测定中间精密度试验

结果表明，本法的仪器精密度、重复性及中间精密度均良好。

6　结论

通过以上含量测定方法学验证试验，证明本研究的HPLC的色谱条件和检测方法可以用于石杉碱甲分散片的含量测定。

[1]谭昌恒，朱大元.石松生物碱研究进展[J].中国天然药物，2003，1（10）：1-7.

[2]王洪新，王键.石杉碱甲的研究进展[J].中国野生植物资源，2001，20（6）:4-10.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典四部0512高效液相色谱法[S].

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则[S].

Determination of Dispersible Tablets of Huperzine-A by HPLC

SUN Wei
（DuoduoPharmaceutical Co.，Ltd.，Jiamusi 154007，China）

The aim of this study is to research on the content through the method of dispersible tablets of Huperzine-A，establishingmethod ofHuperzine-AHPLCmethod for the determination ofcontent.

HPLC；Huperzine-A；dispersible tablets；content determination

10.3969/j.issn.1008-553X.2016.04.044

TQ460.7+2；R917

A

1008-553X（2016）04-0119-03

2016-03-22

孙巍（1981-），女，毕业于齐齐哈尔医学院，工程师，从事药品质量管控工作，0454-8358917，18845452468，hljddyy@163.com。