张 慧



HPLC法测定安乐片中阿魏酸的含量

张 慧

目的 建立安乐片中阿魏酸的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱条件：乙腈-1%醋酸(14:86)为流动相；流速：1.0 ml/min，检测波长：320nm。结果 阿魏酸进样量在0.03648～0.32832μg范围内，线性关系良好，r=0.9998；回收率在95.51～99.04%之间，RSD为1.61%。结论 该方法稳定，结果准确。

高效液相色谱法；安乐片；阿魏酸

安乐片为中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第二册收载品种(书页号：Z2-104；标准编号：WS3-B-0274-90)[1]。安乐片是由柴胡、当归、川芎、茯苓、钩藤、何首乌藤、白术(麸炒)、甘草等八味中药材加工制成，具有疏肝解郁、定惊安神的作用。用于精神抑郁、惊恐失眠、胸闷不适、纳少神疲。当归、川芎为方中主药，具有较强的协同作用。阿魏酸是当归和川芎共有的有效成分之一，它是一种有机酸，可用高效液相色谱法测定其总量。经方法学考察，本方法的线性、精密度、稳定性、重复性、回收率试验均符合规定，故确立本制剂的定量方法为高效液相色谱法测定阿魏酸的含量。

1 仪器与所用试剂

1.1 仪器 SHIMADZU-10Avp 液相色谱仪，N2000 工作站。

1.2 试剂 阿魏酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号0773-9910)；安乐片由四川琦云药业有限责任公司生产；乙腈为色谱纯；其它试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 测定波长的确立 经绘制阿魏酸紫外吸收图谱，阿魏酸在320nm处有最大吸收[2]，故确立320nm为本品中阿魏酸含量测定的波长。

2.2 流动相筛选 对比了乙腈-0.085% 磷酸溶液(17：83)[3]和乙腈-1%醋酸溶液(15：85)[4]对本品中阿魏酸分离的影响，乙腈-1%醋酸溶液(14：86)对阿魏酸分离的效果好于乙腈-0.085% 磷酸溶液(17：83)，因此确定乙腈-1%醋酸(14:86)为本实验中阿魏酸含量测定的流动相。

2.3 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈-1%醋酸(14:86)；流速：1.0 ml/min；检测波长：320 nm。

2.4 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品18.24 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 ml，置棕色100 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml含18.24 μg的溶液。

2.5 供试品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，研细，取约2 g，精密称定，精密加入1%甲酸甲醇溶液25 ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，再称定重量，用1%甲酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[5]。

2.6 线性范围考查 分别精密吸取对照品2μl、6μl、10μl、14μl、18 μl溶液，注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积，以阿魏酸对照品进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：y=2229986.29x+1899.10,r=0.9998。阿魏酸对照品进样量在0.03648～0.32832μg范围内线性关系良好。测定结果见表1。

表1 阿魏酸对照品线性范围考察结果

2.7 精密度试验考查 精密吸取对照品溶液10μl，连续进样6次，测定色谱峰面积，阿魏酸对照品溶液精密度试验符合规定。测定结果见表2。

2.8 稳定性试验考查 精密吸取供试品液10 μl，每间隔1小时进样1次，测定色谱峰面积，阿魏酸色谱峰峰面积积分值基本一致,RSD为1.13%。说明供试品在4小时内具有良好的稳定性。测定结果见表3。

表2 精密度试验结果

表3 稳定性试验结果

2.9 重复性试验考查 取本品2 g，精密称定，共取6份，分别按供试品溶液制备项下方法操作，测定色谱峰面积，计算含量，阿魏酸含量重复性试验符合规定。测定结果见表4。

表4 重复性试验结果

2.10 回收率试验考察 取本品1 g，精密称定，共取6份，精密加入阿魏酸对照品溶液(0.274 mg/ml)1 ml，按供试品溶液制备项下方法操作，测定色谱峰面积，计算，阿魏酸回收率在95.51～99.04%之间，RSD为1.61%，符合规定。测定结果见表5。

表5 回收率试验结果

3 讨论

本品采用高效液相色谱法测定阿魏酸的含量，方法稳定，结果准确，可作为该制剂的质量控制方法。

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中药成方制剂[S].中华人民共和国卫生部，1990:104.

[2] 张玉爱，吴泽榕，郑起平，等.HPLC测定养血当归软胶囊中阿魏酸的含量[J].中成药，2006，28(4)：599-600.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部) [M].北京:中国医药科技出版社，2010:124.

[4] 谢先吉，王临润，吴文娟.通经口服液中阿魏酸含量测定方法的研究[J].药物分析杂志，2005，25(8)：992-993.

[5] 容蓉，袁久荣，王学志.HPLC测定四物汤及其配伍组方中阿魏酸的煎出量[J]. 中国药学杂志，2000，11，35(11)：767-768.

Content Determination of Ferulic Acid in Anle Tablet by HPLC

ZHANG Hui

(Department of Pharmacy, Shenyang Second Hospital of Traditional Chinese Medicine, Liaoning, Shenyang 110101, China)

Objective To develop a method for content determination of ferulic acid in Anle tablet. Method Using HPLC method, the mobile phase was a mixture of acetonitrile-1% acetic acid (14:86). The flow rate was 1.0ml/min with the detection wavelength at 320nm. Result The injection volume of ferulic acid was in the range of 0.03648 ～ 0.32832 μg. The linear relationship was good, r=0.9998. The recovery was between 95.51～99.04%. RSD was 1.61%. Conclusion The method was stable, and the result was accurate.

High performance liquid chromatography; Anle tablet; Ferulic acid

辽宁省沈阳市第二中医医院药剂科(沈阳 110101)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.06.020

1003-8914(2016)-06-0796-02

�秀琴

2015-08-03)