卢永娟 （甘肃省定西市安定区李家堡畜牧兽医站 743000）

小鼠各发情周期卵巢Ghrelin的表达

卢永娟 （甘肃省定西市安定区李家堡畜牧兽医站 743000）

本研究通过免疫组织化学技术及DAB显色技术检测小鼠发情周期ghrelin的表达情况，以研究小鼠动情周期卵巢中ghrelin的定位及表达规律。结果显示，发情前期及间期ghrelin阳性细胞主要在生长卵泡中表达，而发情期开始在成熟卵泡中表达，并且黄体中也有阳性反应，到发情后期成熟卵泡中阳性反应明显，主要集中于颗粒细胞和卵丘；发情间期黄体中阳性反应最强。可见，ghrelin对动物生殖具有重要的影响。

Ghrelin；卵巢；动情周期；免疫组化

Ghrelin是由28个氨基酸组成的内源性肽，属于促生长激素分泌素受体 （GSH-R）的内源性配体，研究发现，ghrelin在卵巢、睾丸中高度表达，且具有调节激素分泌的作用，而激素是调节动物生殖发育的重要物质，ghrelin对动物性腺发育具有重要作用。发情周期是雌性动物生殖发育的特殊，研究ghrelin在此阶段的表达规律对阐明ghrelin调控动物生殖发育机理至关重要[1]。本实验通过免疫组织化学及DAB显色技术对小鼠整个发情周期卵巢内ghrelin的表达进行研究，为ghrelin在生殖系统中作用及ghrelin对动情周期的调控研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

小鼠购于兰州兽医研究所实验动物中心。随机分为4组，每组3只。在室温22℃、控光条件下 (14h光照，10h黑暗)按常规方式饲养。

1.2 方法

采集样品 （根据小鼠发情的不同时期采集卵巢组织）-4%多聚甲醛固定12h-自来水冲洗10h-梯度酒精脱水-二甲苯透明-浸蜡-包埋-切片-使用S-P免疫组化进行染色-显色-照相。

1.3 观察结果

通过免疫组织化学DAB棕色法呈色，免疫法阳性细胞呈棕黄色。

2 结果

结果显示，在发情前期生长卵泡呈阳性表达，部分腔卵泡呈弱阳性，如图A；发情期生长卵泡中免疫反应强阳性，有腔卵泡中阳性反应同发情前期，但部分颗粒细胞中出现阳性细胞，如图B；发情后期主要集中于成熟卵泡及卵母细胞周围颗粒细胞中，如图C；发情间期成熟卵泡中无阳性细胞，而生长卵泡中阳性反应明显，如图D。

图 小鼠发情各期卵巢内ghrelin的表达

3 讨论

本研究发现，小鼠卵巢整个发情周期都有ghrelin的表达，并且呈规律性变化。发情前期生长卵泡阳性免疫反应，发情期开始在成熟卵泡中表达，到发情后期成熟卵泡中阳性反应明显，主要集中于颗粒细胞及卵丘；在间情期成熟卵泡中不表达，在生长卵泡中表达量比较低，在间情期黄体中ghrelin阳性反应达到最强。杜晨光等发现，绵羊各级卵泡中均有ghrelin表达卵母细胞呈强阳性，这与本次研究结果相一致，不同的是，绵羊颗粒细胞及卵丘细胞阳性反应较弱[2]。研究表明，发情周期各个阶段ghrelin在下丘脑和垂体中的表达与卵巢ghrelin的表达不一致，下丘脑、垂体与卵巢ghrelin表达的差异提示，ghrelin与GnRH可能存在某种相互调节作用；小鼠各级卵泡及发情周期各阶段ghrelin表达位置的变化说明，ghrelin对动物卵泡及生殖发育具有重要调控作用。目前，物种间存在的差异还需进一步验证，而且ghrelin通过何种机制调控卵泡发育及生殖的还需要进一步研究探讨。

本实验对小鼠卵巢发情周期各阶段ghrelin进行免疫组化定位研究表明，ghrelin在各个阶段均有表达，且呈规律性变化，揭示ghrelin在生殖调控中具有潜在价值。

[1]杨静,罗英霞,王然,等.Ghrelin在不同生理期小鼠卵巢的表达[J].农技服务,2011,28(5)：660-661.

[2]杜晨光,曹贵方.绵羊卵泡内ghrelin的免疫组化定位[J].华北农学报,2008,23(3)：151-153.