杨泽晓，赵希仑，李 岩，王 波， 姚学萍，王 印，3，*，耿 毅，蒙正群，白 瑜

(1.四川农业大学 动物医学院， 四川 温江 611130； 2.四川农业大学 动物科技学院， 四川 温江 611130； 3.动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 温江 611130)



兔出血症病毒2型的VP60基因保守区人工合成及RT-PCR检测方法初探

杨泽晓1，赵希仑1，李 岩2，王 波1， 姚学萍1，王 印1，3，*，耿 毅1，蒙正群1，白 瑜1

(1.四川农业大学 动物医学院， 四川 温江 611130； 2.四川农业大学 动物科技学院， 四川 温江 611130； 3.动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 温江 611130)

为建立用于兔出血症病毒2型(RHDV2)的快速检测方法，根据GenBank已公布的RHDV和RHDV2VP60基因，设计合成2对特异性引物和10条末端重叠引物，通过重叠PCR 人工合成RHDV2VP60基因中保守区片段，构建重组质粒，并以其为模板，经过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验和35份样品检测应用，初步建立RHDV2 RT-PCR检测方法。实验成功合成RHDV2VP60基因的435 bp保守片段并构建了pMD-19T-RHDV2重组质粒， 初步建立的RHDV2 RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性，RHDV2的检测限度可达到230个拷贝的靶基因片段，检测RHDV、pGM-T-EBHSV(已构建)、兔巴氏杆菌、兔源大肠埃希菌和沙门氏菌均无特异性扩增，样品检测结果显示样品中RHDV2核酸阴性。该研究为中国及时进行RHDV2的防控提供技术储备。

兔病毒性出血症；RHDV2；RT-PCR；重叠PCR

兔病毒性出血症(rabbit hemorrhagic disease，RHD)，俗称兔瘟，自1984年我国首次报道后，世界很多国家也发生并流行[1]。RHD由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV)引起，是兔的一种急性、高度致死性传染病。它主要危害2月龄以上多个家兔品种的成年兔子，并以呼吸系统出血，实质器官淤血、肿大、出血和肝脏坏死为主要特征性病变，此病潜伏期短、发病急、病程短、传播快、死亡率高达100%，严重威胁着世界养兔业的发展[1-3]。……