杜沙沙，靳春荣，李思进，陈 武，梁建芳



脂餐负荷前后ox-LDL和PON1变化及其与动脉粥样硬化关系的研究

杜沙沙1，靳春荣2，李思进2，陈 武2，梁建芳2

目的 探讨动脉粥样硬化进展中脂餐负荷对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)和对氧磷酶1(PON1)的影响。方法 高脂饲养新西兰雄兔12周，初始及第4周、8周、12周给予脂餐负荷，负荷前后采血测定血清ox-LDL、PON1水平；同期超声观察动脉硬化。结果 血清ox- LDL：空腹水平呈升高趋势，4周、8周、12周较初始升高(P<0.05)，8周最高。负荷后，初始先升后降，2 h最高(P<0.05)，8 h最低；4周、8周先升后降，4周时2 h末升高显著(P<0.05)，6 h最低，8周时2 h升高，8 h降低显著(P<0.05)；12周先升后降(P>0.05)。血清PON 1：空腹水平呈显著升高(12周最高，P<0.05)。负荷后，初始先升后降，4 h显著升高(P<0.05)，8 h最低；4周、12周呈降低-升高-降低趋势(6 h升高、8 h最低，P<0.05)；8周先升后降(P>0.05)。结论 动脉硬化进展过程中，机体始终处于氧化应激状态，脂餐负荷可能使氧化抗氧化应激反应增强。

动脉粥样硬化；脂餐负荷；氧化低密度脂蛋白；氧磷酶1

我国心血管病病人达2.9亿，其患病率逐年上升。动脉粥样硬化(AS)是心血管病发生的共同基础，也是危害人类生命的首因。血脂紊乱是AS发生的独立危险因素。目前多种假说阐述AS发生发展，具体机制尚不清楚。2015年提出“坚持百年胆固醇学说不动摇”。 氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)使低密度脂蛋白(LDL)构象改变，更易进入血管壁，从而促进AS进程，是常用氧化损伤标记物。Palavra等[1]发现ox-LDL可预测早期心血管病风险。近年来，氧磷酶(PON1)的抗氧化作用引起广泛关注。本研究通过高脂喂养实验动物兔，不同期给予脂餐负荷，分别测定负荷前后ox-LDL、PON1浓度，以研究其与AS的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 健康新西兰雄兔10只，体重2.4 kg～3.0 kg，太原市小店区科鑫畜牧养殖场提供，分笼饲养，不限饮水。胆固醇由北京索莱宝公司提供，兔ox-LDL、PON1试剂盒购于上海西唐生物科技公司。

1.2 方法

1.2.1 动物模型建立 所有实验动物高脂(1%胆固醇，10%蛋黄，89%普通饲料)喂养12周，初始及第4周、8周、12周禁食水8 h后给予脂餐负荷(2%胆固醇，20%蛋黄，78%普通饲料)。

1.2.2 研究指标测定和超声检查 全部实验动物在研究不同阶段，分别于空腹及负荷后2 h、4 h、6 h、8 h经耳缘静脉采血2 mL，离心(3 000 r/min，15 min)分离血清，-80 ℃保存。研究结束时，用ELISA试剂盒测定血清ox-LDL、PON1水平。静脉采血同时应用超声观察腹主动脉硬化情况。

2 结 果

研究结束时，实验动物经超声观察均出现了动脉硬化。动脉硬化进展中，空腹及脂餐负荷后ox-LDL和PON1变化情况详见表1、表2。

表1 动脉硬化过程中空腹及脂餐负荷后ox-LDL变化(±s) mU/L

表2 动脉硬化过程中空腹及脂餐负荷后PON 1变化(±s) ng/mL

3 讨 论

餐后高脂血症是心血管事件的一个强有力危险因素，餐后脂质水平可诱导增强氧化应激，从而参与动脉粥样硬化形成[2]。氧化应激参与AS发生发展的基本过程，餐后状态增加机体氧化损伤的易感性。富含多不饱和脂肪酸的LDL极易被氧化修饰，形成ox-LDL，使LDL的生物活性发生改变，呈现明显的剂量依赖性细胞毒性[3]、化学趋向性和免疫原性，参与AS发生发展的众多过程。血清ox-LDL水平可反映机体脂质过氧化程度。Violi等[4]认为：在摄入不加10 g橄榄油的地中海饮食2 h后，血清ox-LDL水平显著升高；摄入麦当劳餐者血清ox-LDL较基线水平显著增加[5]。本研究中，动脉硬化不同阶段ox-LDL水平升高，提示AS过程中氧化反应增加，负荷后2 h血清ox-LDL水平较高，与上述研究相似。

PON1是一种与高密度脂蛋白相关的酯酶，具有内酯酶、芳香酯酶活性。PON1可通过抑制LDL的氧化修饰及巨噬细胞向泡沫细胞的转化，从而发挥抗动脉粥样硬化的保护作用。冠心病病人血清PON1活性降低[6]，有学者建议将PON1作为心血管病的独立危险因素，但仍需进一步研究证实。Kim等发现：血清PON1活性随膳食中胆固醇的摄入量增加而升高[7]。本研究发现：动脉硬化进展过程中血清PON1水平逐渐升高，与上述研究结果相符。

膳食胆固醇的摄入可能影响apoA1，改变血清PON1的活性。高脂饮食初始给予脂餐负荷，血清PON1活性升高，可能与胆固醇摄入增加有关。Ayub 等[8]认为心肌梗死病人在症状出现2 h后血清PON1活性开始降低。本研究中，动脉硬化不同阶段，脂餐负荷2 h后血清PON1活性下降，血清ox-LDL水平升高，与上述结果一致，提示脂餐负荷后机体氧化应激反应增强，且可能因为PON1抑制体内LDL的进一步氧化[9]而被消耗，PON1进一步降低；此后血清PON1开始升高，PON1芳香酯活性增加，这可能与餐后PON1内酯酶活性下降、PON1内酯酶和芳香酯活性转变有关[10]，提示可选择其他种类的PON1作为餐后状态的标记。

此外，本研究发现：AS进展中空腹血清ox-LDL、PON1均呈增高趋势，且脂餐负荷后ox-LDL升高，PON1下降，提示高脂饮食过程中，机体始终处于氧化应激状态，脂餐负荷使氧化抗氧化反应加强。

关于动脉硬化进程中脂餐负荷对氧化应激标记物的影响和具体机制，本次研究受实验动物数量及研究期限所限，尚需继续深入研究。

[1] Palavra F，Marado D，Mascarenhas-Melo F，et al.New markers of early cardiovascular risk in multiple sclerosis patients：oxidized-LDL correlates with clinical saging[J].Dis Markers，2013，34(5)：341-348.

[2] Nakamura A，Monma Y，Kajitani S，et al.Effect of glycemic state on postprandial hyperlipidemia and hyperinsulinemia in patients with coronary artery disease[J].Heart Vessels，2015，31(9)：1446-1455.

[3] Saneipour M，Ghatreh-Samani K，Heydarian E，et al.Adiponectin inhibits oxidized low density lipoprotein-induced increase in matrix metalloproteinase 9 expression in vascular smooth muscle cells[J].ARYA Atheroscler，2015，11(3)：191-195.

[4] Violi F，Loffredo L，Pignatelli P，et al.Extra virgin olive oil use is associated with improved post-prandial blood glucose and LDL cholesterol in healthy subjects[J].Nutr Diabetes，2015，5：e172.

[5] Di Renzo L，Marsella LT，Carraro A，et al.Changes in LDL oxidative status and oxidative and inflammatory gene expression after red wine intake in healthy people：a randomized trial[J].Mediators Inflamm，2015(5)：317-348.

[6] Maturu VN，Gupta N，Singh G，et al.Serum paraoxonase (PON1) Activity in North-West Indian Punjabi’s with acute myocardial infarction[J].Indian J Clin Biochem，2013 ，28(3)：248-254.

[7] Daniel S，Amber A，Jane E，et al.Dietary cholesterol increases paraoxonase 1 enzyme activity[J].J Lipid Res，2012，53(11)： 2450-2458.

[8] Ayub A，Mackness M，Arrol S，et al.Serum paraoxonase after myocardial infarction [J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，1999，19(1)：330-335.

[9] Rajkovic MG，Rumora L，Barisic K.The paraoxonase 1，2 and 3 in humans[J].Biochemia Medica，2011，21(2)：122-130.

[10] Kameyama N，Maruyama C，Kotani K，et al.Postprandial paraoxonase 1 activity following consumption of recommended amounts of mixed meals in healthy males[J].J Atheroscler Thromb，2016，23(2):225-232.

(本文编辑郭怀印)

山西省自然科学基金项目(No.2014011040-6)

1.山西医科大学研究生(太原030001)；2.山西医科大学第一医院

靳春荣，E-mail：519349183@qq.com

R543.5 R256.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2016.19.012

1672-1349(2016)19-2246-02

2016-03-05)

引用信息：杜沙沙，靳春荣，李思进，等.脂餐负荷前后ox-LDL和PON1变化及其与动脉粥样硬化关系的研究[J].中西医结合心脑血管病杂志，2016，14(19)：2246-2247.