李永欣， 王晓明， 曾慧杰， 蔡 能， 乔中全

(湖南省林业科学院， 湖南 长沙 410004)

金心扶芳藤组培快繁技术研究

李永欣， 王晓明， 曾慧杰， 蔡 能， 乔中全

(湖南省林业科学院， 湖南 长沙 410004)

为加快金心扶芳藤在园林绿化中的应用，以其带腋芽的茎段为材料，筛选其初代、增殖及生根培养基，建立组培快繁技术体系。结果表明：金心扶芳藤较适宜的初代诱导培养基为MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L，芽的诱导率达96.0%；较适宜的增殖培养基为MS+BA 5.0 mg/L+IBA 0.08 mg/L+NAA 0.06 mg/L，芽的增殖系数达3.9；较适宜的生根培养基为1/2MS+IBA 2.0 mg/L，苗木生根率达100%，平均根数7.8条,根长4.5 cm。

金心扶芳藤； 组培快繁

金心扶芳藤(Euonymusfortuneicv. Sunspot)为卫矛科卫矛属多年生常绿藤本植物，其叶深绿色,金黄色斑镶嵌其中，在暖地秋冬季，其叶红色，观赏价值高，可大面积应用于城市园林绿化中[1]。2000年以来，先后有科研人员以扶芳藤茎段、叶盘、子叶、下胚轴等为外植体，开展组培技术研究[2-14]，建立了植株再生技术体系。目前尚未有金心扶芳藤组培技术研究的报道。为了加快金心扶芳藤在园林绿化中的应用，我们系统开展了其组培快繁技术研究，建立了相应组培快繁技术体系，为大规模工厂化繁育金心扶芳藤苗木奠定基础。

1 材料与方法

1.1试验材料

供试金心扶芳藤植株由美国缅因大学张冬林博士提供。剪取当年抽生的新梢上带腋芽的嫩枝茎段为试验材料。

1.2试验条件

将采集的嫩枝进行常规消毒处理，消毒后将嫩枝切段，每段带1个腋芽，接种在初代培养基上；选取已萌发的培养体开展丛生芽及生根诱导试验。

在基本培养基中附加不同配比的BA、IBA、NAA及0.7%的琼脂和3%的蔗糖，培养基pH 5.8，在121 ℃和1.1 kg/cm2条件下用高压蒸汽灭菌锅灭菌20 min。培养温度为(25±2)℃，光照1500～2000 lx，光照时间12 h/天。

1.3试验方法

1.3.1 初代培养基筛选 初代基本培养基为MS，添加BA 1.0 mg/L，同时分别添加IBA 0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L，以不加激素的培养基为对照。20天后观察腋芽诱导和新芽生长状况，统计腋芽诱导率，筛选较好的初代诱芽培养基。

1.3.2 增殖培养基筛选 将萌发的新芽剪切成2.0～3.0 cm左右长的茎段进行继代增殖培养。按L9(34)试验设计筛选较好的增殖培养基配方，参试因子为基本培养基(MS、White、B5)、BA(1.0、2.0、5.0 mg/L)、IBA(0.02、0.05、0.08 mg/L) 、NAA(0.01、0.03、0.06 mg/L)。每处理6瓶，每瓶3株苗，45天后观察试管苗增殖状况，统计增殖系数、丛生芽平均高度。

1.3.3 生根培养基筛选 组培苗生根诱导基本培养基为1/2MS，分别添加浓度为0、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L的IBA。每处理6瓶，每瓶6株苗，35天后观察试管苗生根状况，统计生根率、平均生根数和平均根长。

2 结果与分析

2.1初代诱导培养基筛选

金心扶芳藤接种到初代培养基上培养，第8天腋芽开始萌发，第15天新芽长达1.5～2.0 cm高。20天后观测结果见表1。由表1可知： 接种到MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L培养基上培养的外植体，其腋芽诱导率达96.0%，新芽生长发育较好，长达3.7 cm，叶色正常。但IBA浓度并不是越高越好，当IBA为0.10 mg/L时，虽然新芽长达4.2 cm，但腋芽诱导率仅为88%。在不添加任何外源激素的培养基上，外植体的腋芽萌动率仅为16.0%，新芽生长缓慢。因此，附加一定浓度的外源激素对金心扶芳藤腋芽的诱导非常重要。

表1 不同培养基对腋芽萌发的影响Tab 1 Effectsofdifferentinductivemediumongerminationofax⁃illarybuds处理激素浓度(mg/L)BAIBA接种数(个)腋芽诱导率(%)新芽长(cm)11 00 025058 02 521 00 055096 03 731 00 105088 04 240 00 005016 01 8

2.2丛生芽增殖培养基筛选

将金心扶芳藤新芽接种到增殖培养基上培养，第8天开始分化丛芽，培养45天后，增殖系数和丛生芽高度见表2。由表2可以看出：金心扶芳藤在附加BA 5.0 mg/L、IBA 0.08 mg/L、NAA 0.06 mg/L的MS培养基上培养，其芽的增殖系数达3.9，丛生芽高达3.8 cm；试管苗粗壮，长势好，适宜诱导生根与瓶外生根，且成活率高。在White和B5培养基中培养，其芽的增殖系数均低于2.0；试管苗细弱，部分丛生芽叶片发黄脱落，不适宜诱导生根，苗木移栽成活率较低。以增殖系数为主要评价指标，综合考虑丛生芽高度、苗木长势，宜选择MS+BA 5.0 mg/L+IBA 0.08 mg/L+NAA 0.06 mg/L作为金心扶芳藤的增殖培养基。

表2 不同培养基对丛生芽增殖的影响Tab 2 Effectsofdifferentmediumonproliferationofmultipleshoots培养基编号基本培养基激素(mg/L)BAIBANAA增殖系数丛生芽高(cm)1MS1 00 020 013 13 52MS2 00 050 033 64 53MS5 00 080 063 93 84White1 00 050 061 81 95White2 00 080 011 82 66White5 00 020 031 92 37B51 00 080 031 72 58B52 00 020 061 72 19B55 00 050 011 82 3

2.3生根培养基筛选

金心扶芳藤试管苗于生根培养基中培养15天左右开始生根，35天后调查结果见表3。由表3可以看出： 当IBA浓度为2.0 mg/L时，组培苗生根率高达100%，平均根数达7.8条，平均根长达4.5 cm，移栽成活率高。在不添加任何生长素的培养基中的组培苗也能诱导生根，但是培养28～30天才开始生根，组培苗长势差，部分组培苗叶片萎蔫脱落，生根率、根数和根长也不及添加了IBA的处理。可见，培养基中添加适量生长素有利于诱导组培苗生根，但浓度过高(5.0 mg/L)反而导致其基部产生大量愈伤组织，降低了生根率(51.4%)，只有浓度适宜才能更好的诱导金心扶芳藤苗生根。

表3 不同培养基对组培苗生根的影响Tab 3 Effectsofdifferentmediumonrootingoftissueculturedseedlings培养基编号IBA浓度(mg/L)生根率(%)平均根数(条)平均根长(cm)10 020 32 80 820 575 05 24 231 060 05 63 142 0100 07 84 555 051 44 56 3

3 结论与讨论

本试验以金心扶芳藤当年生枝条带腋芽茎段为外植体，建立了组培快繁技术体系。

(1) 较好的初代培养基为MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L，外植体萌芽率达96.0%，新芽长达3.7 cm。

(2) 增殖培养基宜选择MS+BA 5.0 mg/L+IBA 0.08 mg/L+NAA 0.06 mg/L，芽的增殖系数达3.9，丛生芽高达3.8 cm。吴海红[15]研究了‘Canadale黄金’扶芳藤的组织培养，认为‘Canadale黄金’扶芳藤适宜的不定芽分化培养基为WPM + BA 3 mg /L + IBA 0.2 mg/L + 蔗糖30 g/L，芽的增殖系数为3.3，较本试验的低。

(3) 本试验组培苗生根为瓶内培养，生根率达100%。陆秀君[3]曾采用试管外生根的方法培养扶芳藤完整组培苗，其方法是将组培苗茎基部蘸取0.05 mg/ L 的IBA， 处理10 s后扦插在盛有基质的花盆中，基质中加入生根培养液(成分∶ 以MS培养基矿物成分、有机质, 加IBA 2.5 mg/L),15天 后,小苗均长出强壮的根。我们也开展了金心扶芳藤的瓶外生根方法研究，将组培苗茎基部速蘸500 mg/L的KIBA，处理10 s后扦插在泥炭土∶ 珍珠岩=1∶ 3(体积比)的基质中，10天左右小苗开始生根，20天后生根率达100%。

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Researchontissuecultureandrapidpropagationof‘Euonymusfortuneicv.Sunspot’

LI Yongxin, WANG Xiaoming, ZENG Huijie, CAI Neng,QIAO Zhongquan

(Hunan Academy of Forestry，Changsha 410004，China)

To speed up the application of ‘Euonymusfortuneicv. Sunspot’ in the landscape, with its stem segments with axillary buds of material, the initial screening, to establish tissue culture and rapid propagation technology system. Results showed that, the appropriate medium on original culture was MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.05 mg/L, germination frequency of axillary buds reached 96.0%; The suitable proliferation medium were MS+BA5.0 mg/L+IBA0.08 mg/L+NAA 0.06 mg/L, and the multiplication coefficient were 3.9; The proper rooting medium was 1/2MS+IBA2.0 mg/L，rooting rate was up to 100%，root number 7.8，root length was 4.5 cm.

Euonymusfortuneicv. Sunspot; tissue culture and rapid propagation

2016-09-18

国家林业局948项目(2003-4-26)。

李永欣(1976-)，女，副研究员。主要从事木本花卉和木本药用植物遗传育种、栽培与生理生化研究。

Q 943, Q 949.754.7

A

1003 — 5710(2016)06 — 0078 — 03

10. 3969/j. issn. 1003 — 5710. 2016. 06. 017

(文字编校：唐效蓉)