◎廖妍俨，龙四红，孙 棣，陈 洪

（1.贵州省产品质量监督检验院，贵州 贵阳 550016；2.贵阳市疾病预防控制中心，贵州 贵阳 550002）

UPLC-MS/MS法测定动物源性食品中硝基呋喃代谢物残留量

◎廖妍俨1，龙四红1，孙 棣1，陈 洪2

（1.贵州省产品质量监督检验院，贵州 贵阳 550016；2.贵阳市疾病预防控制中心，贵州 贵阳 550002）

本研究建立了动物源性食品中四种硝基呋喃代谢物的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/ MS）的检测方法。该方法对4种硝基呋喃代谢物的检出限均为0.25 μg/kg，线性范围均为0.5～10.0 μg/L，加标回收率为81.6%～97.3%，相对标准偏差均小于10%。该方法测定时间短、稳定性强、灵敏度高、重现性好，能满足畜禽肉中4种硝基呋喃代谢物残留检测的要求。

硝基呋喃代谢物；UPLC-MS/MS；畜禽肉

硝基呋喃类药物是一种广谱抗生素，对大多数真菌和原虫等病原体具有杀灭作用。此类药物主要作用于微生物酶系统，抑制微生物体内乙酰辅酶A的生成、干扰其糖类的合成代谢，从而起到抑制病原菌生长的作用［1］。研究表明，硝基呋喃类药物在动物体内迅速分解产生代谢物，在弱酸性条件下，这些结合态代谢物可从蛋白质中释放出来，对人体造成危害［2，3］。因此，通过检测动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物，能起到对此类药物使用情况的监控作用。

目前国内外对于硝基呋喃代谢物类药物及其代谢物的检测方法主要有高效液相色谱法［4］、酶联免疫法［5］和液相色谱-串联质谱法等，使用最多的是液相色谱-质谱联用法。本研究旨在建立动物源性食品中4种硝基呋喃代谢物的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，并对样品前处理方法、色谱条件、质谱条件等进行优化。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

甲醇、乙腈（色谱纯、MERCK）；甲酸、冰醋酸（色谱纯、Fisher Chemicals）；2-硝基苯甲醛（2-NBA、梯希爱）；二甲亚砜（DMSO、慧颖生物科技有限公司）；盐酸（重庆川东化工集团有限公司）；乙酸铵（天津市科密欧化学试剂有限公司）；乙酸乙酯（上海申博化工有限公司）；磷酸氢二钾（成都金山化学试剂有限公司）。

1.2 仪器与设备

ACCELA液相色谱仪（美国Thermo）；TSQ QUANTUM ULTRA质谱仪（美国Thermo）；自动恒温震荡器（昆山市仪器有限公司）；固相萃取装置W-SPE 24（莱伯泰科仪股份有限公司）；Allegra X-22系列多功能台式高速离心机（美国贝克曼库尔特公司）。

1.3 方法

1.3.1 色谱和质谱条件

Thermo Aquasil C18色谱柱（150 mm×2.1 mm×1.7μm）；流动相A为含0.1%甲酸的乙腈，B为含0.1%甲酸水溶液；梯度洗脱程序：0～2 min，7%A；2.1～7 min，7%～85%A；7.1～10 min，7%A；流速：300μL/min；进样量：10μL；柱温：常温。

采用电喷雾离子源（ESI）；正离子扫描；扫描模式：选择反应监测模式（SRM）；喷雾电压（IS）：3 000 V；离子源温度：350 ℃；离子传输毛细管温度：250 ℃；鞘气压力40 Arb，辅助气流量10 Arb。

1.3.2 样品前处理方法

精确称取待测样品2.00 g于50 mL离心管中，加入10 mL甲醇∶水混合溶液（2∶1，V/V），均质器12 000 r/min均质1 min，弃去上清液。再向离心管中加入5 ng混合内标标准溶液，使4种硝基呋喃代谢物内标物最终测定浓度为2.0 ng/mL。样品溶液中加入10 mL 0.2 mol/L HCl，再加入200 μL衍生化试剂2-硝基苯甲醛（2-NBA）溶液，置于37 ℃恒温水浴中振荡16 h。样品溶液取出后静置至室温，加入5 mL 0.1 mol/L磷酸氢二钾溶液，经离心机8 000 r/min离心5 min后，滤纸过滤，取滤液过固相萃取柱（HLB），样品溶液全部通过固相萃取柱后用10 mL水洗涤，用5 mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于50 ℃下用氮气吹干，用10%的乙腈溶液溶解并定容至1.0 mL，混匀后过0.2 μm有机相滤膜，待测。

2 结果与分析

2.1 前处理方法的优化

国家标准中的方法直接用离心后的上清液过HLB小柱，因样品匀浆均质后成为浆状，易在过柱时堵塞固相萃取小柱，且目标物不宜洗脱，操作繁琐，导致样品回收率降低。因此本实验增加了滤纸过滤步骤，将全部衍生液过滤后再上柱，减少了过柱时间，提高了回收率。

2.2 质谱条件的优化

针对畜禽肉样品基质复杂的特性，本实验采用选择反应监测模式（SRM）进行扫描，其原理是针对二级质谱或多级质谱的某两级之间，即母离子选一个离子碰撞后，从形成的子离子中也只选一个离子。因为两次都只选单个离子，所以样品中的噪音和干扰被排除得更多，有效提高方法的灵敏度和重现性。

2.3 线性范围和检出限

对4种硝基呋喃代谢物标准样品进行检测，线性范围和检出限见表1。

表1 线性范围和检出限表

2.4 样品的测定

采用上述方法对购自超市和农贸市场的16份样品（猪肉和鸡肉各8份）进行检测，结果显示有一个批次的猪肉检测到有呋喃西林代谢物（SEM）存在，含量为4.7 μg/kg，其余样品均未检出硝基呋喃类代谢物。该方法稳定性强、灵敏度高、重现性好，适用于对动物源性食品中4种硝基呋喃类药物代谢物残留的同时检测。

［1］潘心红，罗晓燕，李军涛，等.直接测定虾类硝基呋哺类残留量方法的探讨［J］.中国卫生检验杂志，2010（4）：740-741.

［2］孙言春，张 洁，牟振波，等.固相萃取液相色谱串联质谱测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留研究［J］.中国渔业质量与标准，2011（2）：54-59.

［3］戴 欣，李改娟.水产品中硝基呋哺类药物残留的危害、影响以及控制措施［J］.吉林水利，2011（9）：61-62.

［4］宋 凯，肖桂英，姜 桥，等.高效液相色谱法同步测定饲料及兽药中4种硝基呋喃类药物［J］.粮食与饲料工业，2010（3）：49-51.

［5］沈美芳，宋红波，耿雪冰，等.酶联免疫法测定水产品中呋喃唑酮代谢物AOZ的残留［J］.水产学报，2006（4）：520-524.

Determination of nitrofuran metabolites residues in animal derived food by UPLC-MS/MS

Liao Yanyan1， Long Sihong1， Sun Di1， Chen Hong2
（1.Guizhou Products Quality Supervision and Inspection Institute， Guiyang 550016， China；2.Guiyang Center For Disease Control and Prevention， Guiyang 550002， China）

This study established the determination of nitrofuran metabolites residues in animal derived food by ultra pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）. The detection limits of four kinds of nitrofuran metabolites were 0.25 μg/kg and the linear range was between 0.5～10.0 μg/L， the recovery rates were 81.6%～97.3%， the RSD were less than 10%. The method is rapid，simple，precise，sensitive and suitable for determination of nitrofuran metabolites residues in animal derived food.

Nitrofuran metabolites residue； UPLC-MS/MS； Animal derived food

TS207.3

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.16.048