陈芳红，李 涛，李 崭，孙超尘，王 慧

◇基础医学研究◇

肠出血性大肠杆菌效应因子z2151的E3泛素连接酶活性鉴定

陈芳红1，2，李 涛2，李 崭2，孙超尘2，王 慧1，2

目的 利用基因工程方法原核表达z2151蛋白，并鉴定其E3泛素连接酶活性。方法 以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板，PCR扩增目的基因，构建重组表达载体pET22b-z2151，转化BL21（DE3），诱导蛋白表达，采用镍柱亲和纯化获取目的蛋白；通过体外泛素化实验检测蛋白泛素连接酶活性。结果 亲和纯化得到较高浓度和纯度的z2151蛋白，其在体外泛素化反应中能够促使泛素小分子形成多聚泛素链，即有E3泛素连接酶活性；而且对E2泛素结合酶具有一定的选择特异性。结论 原核表达质粒pET22b-z2151构建成功，目的蛋白z2151具有泛素连接酶的体外泛素化能力，并且针对不同的E2酶亲和力不同，这些都为后续功能机制研究奠定了基础。

基因工程；肠出血性大肠杆菌O157∶H7；泛素连接酶；体外泛素化

肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157∶H7是人和动物重要的肠道致病菌［1］，可通过侵染水源、食物等感染宿主导致腹泻、出血性结肠炎等，带来严重的临床危害［2］，严重者可导致死亡［3］。2006年PNAS上报道过一些EHEC效应因子，其中z2151属于效应分子之一，存在于细菌前噬菌体上，属于非毒力岛编码的效应因子，是一种含有类似Ring结构域（环指结构）的E3泛素连接酶。E3泛素连接酶发现较晚，数量庞大且功能复杂，是近年来研究的热点，E3泛素连接酶是泛素化途径中决定底物特异性的关键酶，参与细胞周期、信号转导、炎症反应等的介导调控［4］。……