张宇航，郝景锋，薛会明，刘健博，兰文峰，李心慰，刘国文

（1.吉林农业科技学院动物科技学院，吉林吉林132000；2.吉林大学动物医学学院，吉林长春130062）

长白山梅花鹿鹿茸干细胞S100A4基因克隆及原核表达

张宇航1，郝景锋1，薛会明1，刘健博1，兰文峰1，李心慰2，刘国文2

（1.吉林农业科技学院动物科技学院，吉林吉林132000；2.吉林大学动物医学学院，吉林长春130062）

为了研究S100A4蛋白在鹿茸发生过程中的生物学功能，构建长白山梅花鹿鹿茸S100A4基因原核表达载体，并进行BL21原核表达；自鹿茸骨膜中提取总RNA，逆转录成cDNA，以特异性引物扩增S100A4，扩增产物克隆到pMD18-T载体并测序鉴定，将目的片段和原核表达质粒pET-15b分别用BamH I和HindⅢ双酶切并连接，再将重组质粒转入BL21用TPIG进行诱导表达；结果通过序列的对比分析，S100A4基因是一个相对保守的基因，与多个物种的匹配度达到90%，与牛S100A4基因同源性最高，达到98.4%；成功构建了pET15b-S100A4表达质粒，转化BL21诱导表达后，SDSPAGE电泳检测显示表达的蛋白分子量为11 kD，与预期一致。表明梅花鹿鹿茸干细胞S100A4基因的可以在原核中克隆、分析和表达，为真核表达和进一步的蛋白功能分析奠定了基础。

梅花鹿；S100A4基因；克隆；原核表达

S100蛋白家族是一类EF-手型钙结合蛋白，是一类广泛存在的钙调蛋白，通过钙离子信号传导途径参与细胞分裂、分化、肿瘤生长以及细胞外基质分泌活动等过程［1］。S100A4蛋白是由101个氨基酸组成的多肽，在多种肿瘤细胞中高表达，而且恶性肿瘤中比良性肿瘤中表达更高，在正常成年器官和组织中不表达，目前的研究确定S100A4蛋白是一个与恶性肿瘤密切相关的因子［2］。……