张青青++余胜民++苏青++黄琳芸

【摘要】目的：建立壮药香花护乳凝胶剂的薄层鉴别方法，并探讨其皮肤用药的安全性。方法：采用TCL法对处方中龙血竭、莪术进行定性鉴别，采用健康家兔进行皮肤急性毒性试验。结果：TCL鉴别分离度良好，专属性强；该制剂对家兔完整皮肤和破损皮肤均无急性毒性反应。结论：TCL法可作为该制剂质量控制方法之一；该制剂临床经皮肤给药是安全的。

【关键词】壮药香花护乳凝胶剂；薄层色谱法；急性毒性

【中图分类号】R9144【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）18-0008-02

壮药香花护乳凝胶剂是我院自制的外用制剂，由龙血竭、蒲公英、莪术等8味药材组成，具有活血化淤，软坚散结的作用，临床用于治疗气滞血瘀引起的乳腺增生症。方中主药龙血竭具有活血化瘀，止痛的功效，莪术具有行气活血，消积止痛的功效。为控制该制剂产品质量，本研究对龙血竭、莪术进行了薄层色谱鉴别，并采用动物皮肤急性毒性的试验研究其安全性，为临床用药的提供理论依据。

1仪器与材料

11仪器XS 205 BDU梅特勒电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；SB2200超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）；UV-1型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；微量进样器（上海医用激光设备厂）。

12材料龙血竭对照药材（批号110781-200613）、莪术对照药材（批号110625-200902）由中国药品生物制品检定所提供。香花护乳凝胶剂和试药均由广西壮医医院药剂科提供。硅胶G、H薄层板（青岛海洋化工集团公司）。所用试剂均为分析纯。

13动物健康成年白色家兔20只，雌雄各半，体质量20～25Kg，一级合格，由广西医科大学动物中心提供，合格证号：HCXK桂2009-0002，动物房温度[BF]：（[BFQ]25±1）℃，相对湿度：50%～70%。试验期间动物单独分笼标准饲料饲养，自由饮水与摄食。

2薄层鉴别方法与结果[1]

21龙血竭的薄层鉴别取本品10g，加乙醚10mL，密塞，振摇10min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取缺龙血竭的供试品10g、龙血竭对照药材01g，同法制成阴性对照溶液、对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述供试品溶液、阴性样品溶液、对照药材溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（95∶[KG-*3/5]05）溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性无干扰。见图1。

22莪术的薄层鉴别取本品内容物10g，置具塞三角瓶中，加石油醚（30～60℃）10mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另各取莪术供试样品10g、莪术对照药材05g，同上述方法制得阴性对照溶液、对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚（30～60℃）–乙酸乙酯（96：4）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点（莪术特征斑点a的Rf值为052，b的Rf值为056）。阴性无干扰。见图2。

3皮肤急性毒性试验[2]

31分组及给药将20只家兔随机分为5组，每组4只，即完整皮肤受试药组，完整皮肤赋形剂组，破损皮肤受试药组，破损皮肤赋形剂组，生理盐水组。于实验前24h，将每只家兔背部脊柱两侧用剪刀去毛，再用8%硫化钠脱毛（每侧约为10cm×10cm）。给药前检查去毛皮肤是否受损伤，有损伤的皮肤不宜进行实验。破损皮肤的制作采用灭菌注射针头将去毛消毒皮肤“#”字型划破，以轻度渗血为度。

按照分组分别在家兔背部去毛区涂生理盐水2mL，空白凝胶剂及香花护乳凝胶剂涂药量为每只2g，用消毒纱布和无刺激性胶布将涂药区覆盖固定。给药24h后，用温水洗去残留涂抹物。去除涂抹物后1、24、48、72h至第7日，每日观察涂抹部位有无红斑和水肿等情况，以及上述变化的恢复情况和时间，并按评分标准打分及强度标准判断刺激强度。若有死亡动物应及时进行尸检并进行病理学检查。

32皮肤刺激性反应评分标准根据《中药药理实验方法学》，以红斑、水肿等为评价指标。评分标准及刺激强度评价标准分别见表1、2。

每组动物平均分值=∑红斑和水肿积分/每组动物数

33测定结果由表3可知，香花护乳凝胶剂与其空白凝胶剂对完整皮肤组和破损皮肤组动物的受试部位均无红肿、红斑、肿胀等刺激变化，其皮肤刺激平均分值均<050分，表明两者对正常皮肤和破损皮肤均无刺激性；生理盐水组动物皮肤无红肿、红斑及水肿等刺激现象。

4讨论

本方剂型为凝胶膏剂，根据各药材所含主要活性成分及理化性质对方中药材进行定性研究，龙血竭的展开剂三氯甲烷和甲醇的比例经过反复试验，最后以三氯甲烷–甲醇（95∶[KG-*3/5]05）分离效果最佳；莪术对比了环乙烷–醋酸乙酯（8∶[KG-*3/5]2）、石油醚（30～60℃）–乙酸乙酯（96∶[KG-*3/5]4），发现后者斑点分离度较清晰，展开效果更好，故选择后者。由结果可知，认为本次实验所选方法科学准确，具有较好重现性，能较好地控制该制剂质量。

皮肤刺激性试验结果表明，香花护乳凝胶剂对完整皮肤、破损皮肤均无刺激性反应，未见毒性症状表现，表明本制剂是安全可靠的。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2]李仪奎.中药药理实验方法学（第二版）[M].上海：上海科学技术出版社，2006.

（编辑：梁志庆）