李数霞　黄　敏　杨美春　方　刚

（1.广西中医药大学，广西 南宁 530001；2.广西中医药大学附属瑞康医院，广西 南宁 530011）

正交试验法优选复方小钻凝胶的提取工艺

李数霞1黄敏2杨美春1方刚1

（1.广西中医药大学，广西 南宁 530001；2.广西中医药大学附属瑞康医院，广西 南宁 530011）

目的：利用正交试验设计研究复方小钻凝胶的提取工艺条件。方法：以加水量、提取次数、提取时间为考察因素，以乙醇浸出物为评价指标，采用L9（34）正交试验设计，优选最佳提取工艺条件。结果：最佳提取工艺为用8倍量水提取二次，每次1.5h。结论：优选的工艺稳定可行，乙醇浸出物总量较高。

复方小钻凝胶；乙醇浸出物；正交试验

复方小钻凝胶由小钻、走血风、九层风、救必应、一匹绸、大透地龙等六味广西特色民族药组成，在广西，壮药主要分布在贵港、防城、苍梧、上思、武鸣等壮族地区。方中壮药是壮医临床常用解毒药，具有调水道、气道、除湿毒等功效，用于咳嗽、肾炎消肿、筋络不舒［1，2］。处方来源于临床应用验方，主要用于治疗慢性盆腔炎、盆腔炎性疾病后遗症、原发性痛经等妇科痛症，具有活血化瘀、祛湿止痛、穿经走脉的功效，临床应用为灌肠给药，因此采用水提工艺。本试验采用正交设计法，以乙醇浸出物为考察指标，对复方小钻凝胶的提取工艺进行优选。

1　试剂、材料与仪器

乙醇、水、电子天平、多功能提取罐。

2　 方法与结果

2.1提取条件的确定

影响本方提取效果的因素有：加水量（A）、提取次数（B）、提取时间（C），每个因素选3个水平，A选取6、8、10倍量，B选1、2、3次，C选1、1.5、2h，采用L9（34）正交表进行研究，因素水平表见表1。

表1　提取条件因素水平表

2.2考察指标的确定

本方中药材均收载于《广西壮族自治区壮药质量标准》中，参考该标准，各药味均有乙醇浸出物检查，故选择乙醇浸出物为考察指标。

2.3正交试验设计及结果分析

各参数按表2设置条件，共9个试验。每个试验药材量为1/5处方量（约1250g），药材加水量、提取次数、提取时间等参数按表2条件，提取液滤过，滤液合并，浓缩成浸膏。按《中华人民共和国药典》2010版一部附录X A浸出物测定法——醇溶性浸出物测定法，计算浸膏中醇溶性浸出物的总量，结果见表2，方差分析结果见表3。

表2　提取条件正交试验表（1/5处方）

表3　方差分析表（乙醇浸出物）

直观分析表明，B提取次数为主要影响因素，A加水量为次要因素，C提取时间为最次要因素；以乙醇浸出物为评价指标的最优条件为A2B3C3，B2与B3、C2与C3相差较小，小于误差，综合考虑生产成本，故本次正交试验初步选定提取条件为A2B2C2，即：用8倍量水提取二次，每次1.5h。

2.4验证试验

根据正交试验结果选定的条件进行验证试验，每个试验投料量为1/5处方，以乙醇浸出物含量为评价指标，结果分别为31.8g、33.0g、32.1g，与正交试验5、6结果基本一致，表明工艺稳定，选择结果可信。

2.5纯化工艺及结果2.5.1 纯化方法

取1个处方量药材，加8倍量水煎煮2次，每次1.5h，提取液200目滤过，滤液均分成4份（每份相当于0.25个处方），进行下列实验：

（1）提取液浓缩，得浸膏，测定含固量及乙醇浸出物量。

（2）提取液浓缩至相对密度1.20（60℃），放冷，加入乙醇使含醇量达60%，放置24h，滤过，滤液浓缩，得浸膏，测定含固量及乙醇浸出物量。

（3）提取液浓缩至相对密度1.20（60℃），放冷，加入乙醇使含醇量达70%，放置24h，滤过，滤液浓缩，得浸膏，测定含固量及乙醇浸出物量。

（4）提取液滤液浓缩至相对密度1.20（60℃），放冷，加入乙醇使含醇量达80%，放置24h，滤过，滤液浓缩，得浸膏，测定含固量及乙醇浸出物量。

乙醇浸出物量测定：按《中华人民共和国药典》［3］2010版一部附录X A浸出物测定法——醇溶性浸出物测定法测定，取浸膏约2～4g，精密称定，置100ml的锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，称定重量，静置1h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量。计算供试品中醇溶性浸出物的含量（%）。

考察指标：以干膏收率及乙醇浸出物为指标，结果见表4。

表4　纯化方法考察结果表（每组1/4处方，每组生药投料量1562.5）

2.5.2实验结果

实验结果表明，醇沉前后浸膏中的乙醇浸出物量和紫丁香苷量差别不大，醇沉后的浸膏更适合制成液体、半固体制剂，70%乙醇醇沉工艺和80%乙醇醇沉工艺有利于干膏纯化，综合考虑临床适用性、提取物料成本，选择70%乙醇醇沉工艺。

3　 讨论

本方中药材载于《广西壮族自治区壮药质量标准》、《中国现代瑶药》中，参考该标准，各药味均有乙醇浸出物检查，故选择乙醇浸出物为考察指标。

本方在临床为灌肠给药，适宜采用水提工艺进行提取。本研究采用正交试验优选出复方小钻凝胶的最佳提取工艺，浸膏中乙醇浸出物含量较高。根据正交实验结果8倍量水提取2次，每次2h为最佳工艺，因提取时间为最次要影响因素，无显著性差异，结合实际生产情况，故选定提取工艺为8倍量水提取2次，每次1.5h。通过验证试验，可知该工艺稳定、可行；为制备本方剂型提供切实可行的提取工艺。

在中药制剂生产中，常用的提取纯化方法之一是水提醇沉法。醇沉时乙醇浓度对制剂疗效、制剂成型等有着重要影响，同时也影响剂型的选择，服用剂量及产品稳定性等，因而，醇沉时合理选择乙醇浓度对本方起着重要作用。有研究表明，水提液浓缩醇沉后，能够明显降低服用剂量［4］。水提醇沉法复方小钻凝胶采用水提工艺，水提物中含较多大分子树胶、粘液质、蛋白质、多糖类等成份，这些成份的生理活性与本品功能主治不一致，可视为杂质存在，为不影响干膏收率，采用醇沉方法去除杂质。

凝胶属于半固体制剂，在本实验中采用水提醇沉的方法有效的去除了大部分杂质成分，得到的浸膏更适合制成液体、半固体制剂。

70%、80%浓度的乙醇醇沉后与60%浓度乙醇醇沉后乙醇浸出物总量相差不大，但干膏收率更低，即高浓度60%乙醇醇沉后仍含有较多杂质，而70%和80%乙醇醇沉明显减少了杂质的含量；综合考虑临床适用性、提取物料成本，选择70%乙醇醇沉工艺。纯化后的工艺更有利于凝胶剂型的制备。

［1］ 广西壮族自治区食品药品管理局.广西壮族自治区壮药质量标准［M］.南宁：广西科学技术出版社，2011.

［2］ 广西壮族自治区中医药研究所.广西药用植物名录［M］.南宁：广西人民出版社，1986：458.

［3］ 国家药典委员会.中国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2015.

［4］ 何雁，辛洪亮，黄恺.等水提醇沉法中醇沉浓度对板蓝根泡腾片制备过程的影响［J］.中国中药杂志，2010，35（3）：288-291.

Optimize the extraction process for Compound Xiaozhun by orthogonal design

Objective： To optimize the extraction process for Compound Xiaozhun by orthogonal design. Method： With the amount of water， extraction time， and extraction times as factors， with the ethanol soluble extraction as indexes， conditions for extraction process were optimized by L9（34） orthogonal test. Results： The optimum extraction process conditions were as follows： 8 volumes of water， extracting for two times with 1.5 h for once. Conclusions： The optimized extraction technology is stable and feasible.

Compound Xiaozhun； ethanol soluble extraction； orthogonal design

R282

A

1008-1151（2016）03-0039-02

2016-02-10

国家科技部“十二五”国家科技支撑计划课题（2013BAI11B06）；广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻1298003-6-9）；广西卫生厅中医药科技专项课题（GZYZ12-03）。

李数霞，女，广西中医药大学医学硕士，研究方向为中药质量标准。