梁　洁　吕松林　孙正伊　金青青　黄春燕

（1.广西中医药大学药学院，广西 南宁 530200；2.广西中医药大学附属瑞康医院，广西 南宁 530001）

广西马尾松松球总多酚的含量测定

梁洁1吕松林1孙正伊2金青青1黄春燕1

（1.广西中医药大学药学院，广西 南宁 530200；2.广西中医药大学附属瑞康医院，广西 南宁 530001）

建立马尾松松球中总多酚的含量测定方法。以没食子酸为对照品，采用紫外-可见分光光度法测定马尾松松球总多酚的含量。没食子酸在浓度1.818～10.908 μg /ml 的范围内与吸光度值呈良好的线性关系（r = 0. 9996），马尾松松球总多酚的平均含量为16.24 mg/g，RSD=0.31%。所建立的方法稳定可靠、操作简便，可作为马尾松松球总多酚的含量测定方法。

马尾松松球；总多酚；紫外-可见分光光度法

松球是松科植物马尾松（Pinus massoniana Lamb）、云南松（Pinus yunnanensis Faranch）、油松（Pinus tabulaeformis Carr）等的球果，又名松塔、松实、松元、小松球等，具有泻下、解毒之功效［1］。松球中具有挥发油、多糖、黄酮类、多酚类、木质 素类等化学成分［2］。马尾松植物资源丰富，分布于国内大部分地区，其中在广西主要分布于南宁、柳州、贵港、玉林、贺州、梧州等地。松球为祛风湿药，能祛风除痹，止咳平喘、祛痰、祛风、抗菌、润肠等［3］。松球中具有多种化学活性成分，其中多酚就占有很大一部分比例。植物多酚是植物体内的复杂分类次生代谢物，是由没食子酸或其聚合物的葡萄糖醇、黄烷醇及其衍生物的聚合物以及二者混合共同组成的多元酚。研究表明多酚具有很强的清除自由基能力和消除自由基毒性作用，同时具有很强的氧化性。它能改善心血管疾病、抗肿瘤、治疗骨质疏松、降血糖、降血脂、治疗神经退行性疾病等作用［4］。前期的实验研究表明，马尾松松球中含有的多酚类成分是其抗氧化作用的重要物质基础之一。为此，本实验采用紫外-可见光分光光度仪对马尾松松球中的总多酚进行了含量测定，为马尾松松球的进一步研究和开发利用提供科学的理论参考。

1　仪器与试药

1.1仪器

UV-1800紫外-可见光分光光度仪（日本岛津公司），TYDE AEU-210型万分之一克电子天平（德国赛多利斯），打粉机（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2材料

没食子酸（中国食品药品检定研究院，批号：110753-201313）；福林酚（上海荔达生物科技有限公司）；碳酸钠、乙醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；蒸馏水。

2　方法与结果

2.1对照品溶液的制备

精密称取没食子酸对照品18.18 mg，先用少量乙醇溶解，再用蒸馏水定容至100ml，配制成0.1818mg /mL没食子酸对照品溶液。

2.2供试品溶液的制备

马尾松松球干燥后粉碎，过60目筛，称取粉末1.0g，精密称定，置于50ml具塞锥形瓶中，加70%乙醇25ml，称定重量，超声30 min后，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，过滤，将滤液放置蒸发皿中，水浴挥干滤液，蒸馏水溶解并定容至25ml容量瓶，即为供试品溶液。

2.3最大吸收波长的确定

精密量取对照品溶液和供试品溶液各1.0ml，置10 ml容量瓶中，分别加入经10倍稀释的福林酚溶液2.5ml及7.5%碳酸钠溶液2ml，摇匀，定容，放置30min后，同法对空白对照溶液显色，用紫外-可见分光光度仪在200～800nm全波长扫描，实验结果显示，对照品与供试品均在760nm处有最大吸收，故选取760nm为测定波长。

2.4标准曲线的绘制

精密量取对照品溶液1，2，3，4，5，6ml分别置于10ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀；精密量取各溶液1.0ml置于10ml容量瓶，按2.3项下方法进行测定，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，回归方程为y=0.0835x-0.0004，r=0.9996，没食子酸对照品1.818～10.908μg /ml与吸光度呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

精密量取供试品溶液1.0ml，按照2. 3项下的方法测定吸光度，连续测定6次，吸光度值RSD为0.55%（n=6）。结果表明，仪器的精密度良好。

2.6稳定性试验

精密量取供试品溶液1.0ml，按照2.3项下的方法，分别在0min、30min、60min、90min、120min、150min测定吸光度，测得吸光度RSD为0.21%（n=6），表明在150min内显色基本稳定。

2.7重复性试验

按照供试品制备方法平行制备6份样品，每份1.0ml，按照2.3项下的方法测定，总多酚含量RSD为0.53%（n=6）。结果表明，该方法重复性良好。

2.8加样回收率试验

分别取已知含量的马尾松松球6份，每份约0.5g，精密称定，分别精密加入一定量的没食子酸对照品溶液，按照2.3项下的方法测定吸光度，计算平均回收率为99.95%，RSD为0.69%（n=6）。结果见表1。

表1　马尾松松球总多酚的加样回收率试验结果

2.9样品测定

分别测定3批样品，按2.3项下的方法进行测定，计算马尾松松松球总多酚的含量，平均含量为16.24 mg/g，RSD为0.31%（n=3）。结果见表2。

表2　马尾松松球总多酚的含量测定结果

3　讨论

目前植物多酚的测定方法有多种，如酒石酸亚铁比色法、高锰酸钾法、原子吸收法、福林酚比色法、紫外-分光光度法等［5-10］。马尾松松球总多酚采用乙醇提取，福林酚-碳酸钠反应显色，紫外-分光光度法测定。该方法操作简便，稳定性好，重复性好，精密度高，准确可靠

在本实验供试品溶液制备过程中，笔者考察了超声、回流和浸渍三种提取方式，在样品分别超声、回流、浸渍提取30 min后，结果浸渍提取的含量最低，超声和回流提取的含量较浸渍提取的高些但相差不大，考虑到超声提取方法操作简单，故选择超声提取方法。笔者还考察了不同的乙醇浓度（30%、50%、70%、90%）对总多酚提取效果的影响，结果显示使用70%乙醇提取总多酚含量较高。本实验以乙醇作为提取溶剂，毒性较低，对实验人员人身安全影响不大，而且价位相对来说较为便宜，更能节省费用，适宜于马尾松松球总多酚的含量测定。

综上，本实验所建立的方法可作为马尾松松球总多酚含量测定依据，为更有效的开发利用马尾松松球资源和建立质量评价方法提供了基础资料。但对于马尾松松球总多酚各种成分的分离、纯化与测定及药理作用等方面的研究更待笔者进一步探索。

［1］ 姚振生.药用植物学［M］.北京：中国中医药出版社，2003：216.

［2］ 《中华本草》编委会.中华本草（第二册）［M］.上海：上海科技出版社，1999：312.

［3］ 吕松林，黄语梦，梁洁，等.松球的药用研究进展［J］.中国医药指南，2014，12（33）：67-68.

［4］ Scalbert A，Manach C，Morand C，et al.Dietary polyphe-nols and the prevention of diseases［J］.Crit Rev Food SciNutr，2005，45（4）：287.

［5］ 王丽珠，吴梭，姚元根，等.酒石酸亚铁分光光度法测定茶多酚［J］.光谱实验室，1997，14（3）：52-54.

［6］ 王文杰.高锰酸钾滴定法测定茶多酚有关用剂的特性研究［J］.福建茶叶，2007（1）：15-17.

［7］ 郎惠云，廖晓玲，董发昕，等.间接原子吸收法测定茶叶中茶多酚的含量［J］.西北大学学报，2003，33（6）：683-685.

［8］ 杨雁芳，艾铁民.紫外分光光度法测定松果菊提取物中多酚［J］.中草药，2005，36（11）：1649-1650.

［9］ 邓刚，母健菲，刘玉琪，等.福林酚比色法和紫外分光光度法测定虫茶中总多酚含量的比较研究［J］.重庆第二师范学院学报，2015，28（5）：167-173.

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Determination of total polyphenol from pinecone of Pinus massoniana Lamb

To establish the determination of total polyphenol in pinecone of Pinus massoniana Lamb. Gallic acid was taken as a

ubstance； the content of total polyphenol was determined by UV-vis spectrophotometry. A linear correlation between density and absorption of gallic acid solution was noted at the concentration of 1.818～10.908 μg /ml （ r = 0. 9996） ，the average content of total polyphenol was 16.24mg/g， RSD =0. 31%. The method was stable and reliable， simple； it could be used for determination of total polyphenol in pinecone of Pinus massoniana Lamb.

Pinecone of Pinus massoniana Lamb；total polyphenol；UV-vis spectrophotometry

R93

A

1008-1151（2016）03-0035-02

2016-02-13

广西高校科学技术研究项目（2013YB120），广西研究生教育创新计划资助项目（JGY2012032），广西壮瑶药重点实验室（桂科基字［2014］32号），壮瑶药协同创新中心（桂教科研［2013］20号），国家中医药管理局科研三级实验室中（壮）药化学与质量分析实验室，广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室，广西高等学校高水平创新团队及卓越学者计划资助。

梁洁（1979-），女，广西中医药大学药学院教授，博士，硕士研究生导师，从事中药药效物质基础与质