严 冬 刘殿昆 司冬晶 郑 密 赵曦阳 曲冠证 李 莹

(东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室，哈尔滨 150040)

适用于双向电泳的杨树叶片蛋白质提取方法的研究

严 冬 刘殿昆 司冬晶 郑 密 赵曦阳 曲冠证 李 莹*

(东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室，哈尔滨 150040)

为了获得分离效果好、清晰度高的杨树叶片蛋白质双向电泳图像，本研究以小黑杨、毛果杨和84K杨叶片为材料，采用三氯乙酸—丙酮沉淀法、Tris-饱和酚法和Tris-三氯乙酸法提取杨树叶片总蛋白质，分别采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向凝胶电泳对蛋白质进行分离，应用Image Master 2D Platinum 6.0软件对这3种蛋白质提取方法得到的双向电泳凝胶进行分析。结果表明：Tris-三氯乙酸法最适用于双向电泳的杨树叶片蛋白质的提取。利用Tris-三氯乙酸法提取蛋白质得到的鲜样中总蛋白质平均含量为949.46 μg·g-1，得到的蛋白质点平均数量为567个，所得到的双向电泳凝胶图谱分离效果好、清晰度高。

杨树叶片；Tris-三氯乙酸法，蛋白质提取；双向凝胶电泳

双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术是蛋白质组学研究中分析和分离复杂蛋白质样品最有效的手段之一[1]。近年来双向电泳技术已经广泛应用于不同植物组织器官中蛋白质的差异研究[2～3]、植物病理学研究[4]，以及植物对逆境反应的分子机理研究等[5～6]。目前关于不同材料的蛋白质样品的制备研究已有很多报道[7～8]，较常见的全蛋白提取方法有尿素—硫脲提取法、Tris-HCl法、酚法、Tris-丙酮-酚法、Trizol沉淀法和TCA丙酮沉淀法等。植物叶片含有大量的多酚、色素、多糖等次生代谢物质，直接影响蛋白样品制备的质量，从而导致双向电泳分离效果不佳[9～10]，因此提取高质量且含量丰富的叶片全蛋白是研究植物叶片蛋白质组学的前提和基础。……