贾佳，林智，曾密，2，李慧，2，张谦，王剑英，郭宏涛

（1.深圳市绿微康生物工程有限公司，广东深圳518055；2.深圳技师学院，广东深圳518116）

产脂肪酶黑曲霉原生质体NTG诱变研究

贾佳1，林智1，曾密1，2，李慧1，2，张谦2*，王剑英1，郭宏涛1

（1.深圳市绿微康生物工程有限公司，广东深圳518055；2.深圳技师学院，广东深圳518116）

以黑曲霉Aspergillus niger G27为初始菌株，制备原生质体。用亚硝基胍（NTG）对所制备的原生质体进行诱变，考察诱变效果。收集斜面菌丝体，经复合酶处理制备原生质体，分别于1×10-3mmol/mL NTG溶液中诱变处理0～60 min，考察菌株的死亡率、菌落变异率和产脂肪酶活性等。结果表明，原生质体再生率为7.5%。随着诱变时间增加，原生质体诱变死亡率、菌落变异率增加，并逐渐趋于稳定。初筛结果为随着诱变时间增加，脂肪酶活性标平均值降低，标准偏差值增加，变异系数值增加。NTG诱变时间为20～40 min时，出现比较多的正变菌株。经过复筛和验证试验，得到P316菌株脂肪酶活性为（394.3±12.9）U/mL，比出发菌株发酵酶活高22.9%；P388菌株为（385.1±11.4）U/mL，比出发菌株发酵酶活高20.1%。可见采用NTG诱变菌株的原生质体获得良好的诱变效果，结合筛选获得了2株遗传稳定的高产突变菌株。

脂肪酶；黑曲霉；原生质体；诱变

脂肪酶是动物体内脂肪代谢的关键酶，广泛应用于饲料中（张志敏等，2013）。黑曲霉（Aspergillus niger）是具有重要工业价值的菌种，主要应用于生物酶制剂生产、有机酸发酵等，可产生脂肪酶、淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶等30多种酶制剂（郭艳梅等，2010）。对于黑曲霉菌种的改造技术主要集中在基因工程改造、理化因子诱变育种和原生质体制备、融合、诱变等（张谦等，2014；……