孙悦鑫 周映包军

210008南京大学医学院附属鼓楼医院皮肤性病科

·论著·

JAK2/STAT3信号通路选择性抑制剂AG490对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物行为学影响及可能机制

孙悦鑫 周映包军

210008南京大学医学院附属鼓楼医院皮肤性病科

目的观察JAK2/STAT3信号通路选择性抑制剂AG490对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（HKF）生物行为学的影响及可能机制。方法将体外培养的人正常真皮成纤维细胞（HSF）、HKF分别用浓度为12.5、25、50、75、100μmol/LAG490处理为实验组，以不加AG490组为阴性对照组。CCK⁃8检测各实验组和阴性对照组HSF和HKF培养24、48、72 h后的细胞增殖抑制率；流式细胞仪检测各组HKF培养24 h后的细胞周期分布及细胞凋亡；RT⁃PCR检测各组HKF培养24 h后，STAT3、细胞周期蛋白D1mRNA的表达情况，同时检测不予任何药物处理的HSF、HKF中STAT3mRNA表达；Western印迹法检测各组HSF、HKF培养24 h后STAT3、p⁃STAT3蛋白表达情况。结果CCK⁃8法显示，随AG490药物浓度的增加和作用时间的延长，AG490对HSF、HKF增殖的抑制率增加，且该抑制作用呈浓度和时间依赖性（均P＜0.05）。在相同浓度AG490作用相同时间的情况下，HKF增殖抑制率大于HSF（P＜0.05）。流式细胞仪显示，随AG490药物浓度的增加，HKFG1期细胞比例逐渐增加（P＜0.01），G2期细胞比例逐渐减少（P＜0.01），S期细胞无明显变化（P＞0.05），细胞凋亡率逐渐增加（P＜0.01）。RT⁃PCR显示，在不予任何加药处理的情况下，体外正常培养HSF、HKF 24 h后，HKF组STAT3mRNA相对表达量显著高于HSF组（P＜0.05）。AG490作用HKF 24 h后，STAT3、细胞周期蛋白D1mRNA相对表达量随AG490浓度的增加而逐渐降低。相关分析显示，经AG490处理的HKF细胞中细胞周期蛋白D1mRNA的表达量与STAT3mRNA的表达量呈正相关（r=0.855，P＜0.01）。Western印迹显示，随AG490药物浓度的增加，HSF、HKF中STAT3、p⁃STAT3的表达均逐渐降低（P＜0.05），且HKF中STAT3、p⁃STAT3蛋白表达量低于HSF（P＜0.05）。……