黄　菁，朱志伟，陈晓宇，于福先，潘建治

(浙江省农业科学院 畜牧兽医研究所，浙江 杭州　310021)



鸡卵清蛋白基因调控序列的克隆与载体构建

黄菁，朱志伟，陈晓宇，于福先，潘建治*

(浙江省农业科学院 畜牧兽医研究所，浙江 杭州310021)

卵清蛋白(ovalbumin)基因在鸡基因组中只有一对等位基因，却能每天合成分泌多达2 g的蛋白，占据卵白蛋白质的50%以上，是外源基因载体表达调控构件的首选。该研究从输卵管特异性启动子方面着手，通过对卵清蛋白基因启动子的筛选优化，找出启动子增强因子的位置以及组织特异性区域。将卵清蛋白基因上游-922～-2 073和-2 801～-3 100区域平均分成12个长度约为150 bp的序列，分别插入到-921～+38序列的上游，成功构建12个系列表达载体，为进一步筛选短缩版优化启动子提供材料；卵清蛋白基因第一内含子区域截断成300 bp左右的迷你内含子序列，成功构建8个迷你内含子系列载体，为筛选优化的迷你内含子提供必要的材料；成功分离鸡输卵管上皮细胞并优化电转染条件，通过荧光素酶活性检测初步筛选出具有最强活性重组质粒pGL4-UP-1412和内含子重组质粒pGL4-mini-intron-3，同时推断出若干包含增强子序列区域。

卵清蛋白基因；调控序列；载体；荧光素酶活性

卵清蛋白(Ovalbumin)在鸡基因组中只有一对等位基因，却能每天合成分泌多达2 g的蛋白，占据卵白蛋白质的50%以上，自然成为外源基因载体表达调控构件的首选。至今，以家禽输卵管定位表达为目标的基因导入研究，绝大部分采用了卵清蛋白基因的调控序列。……