曹 文 博，　郑 秋 月，　张 公 亮，　侯 红 漫

( 1.大连工业大学 食品学院， 辽宁 大连　116034；2.辽宁出入境检验检疫局， 辽宁 大连　116001 )



冻干奶粉样品中大肠杆菌O157和O111的检测方法

曹 文 博1，郑 秋 月2，张 公 亮1，侯 红 漫1

( 1.大连工业大学 食品学院， 辽宁 大连116034；2.辽宁出入境检验检疫局， 辽宁 大连116001 )

应用实时荧光PCR技术建立一种检测冻干奶粉样品中大肠杆菌的方法。通过传统培养法将大肠杆菌O157和O111分离纯化，根据大肠杆菌O157和O111的两对特异性基因rfbE和wbdl设计引物和探针，进行RT-PCR检测；由于该大肠杆菌可能是产志贺毒素大肠杆菌，对STEC的特异性毒力基因stx1、stx2b、eae设计引物和探针并检测。结果表明,该冻干奶粉样品中含有大肠杆菌O157和O111，且致病菌O157检出毒力基因stx1、stx2b、eae，即产志贺毒素与黏附素，致病菌O111检出毒力基因eae，不产志贺毒素而产黏附素。该方法能准确分离大肠杆菌O157和O111，利用实时荧光PCR的高灵敏度和特异性快速检验致病菌及其特异性毒力基因。

大肠杆菌O157；大肠杆菌O111；实时荧光PCR；冻干奶粉

0　引　言

肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157能产生致死性志贺毒素(Shiga toxin, Stx)，1982年被确认为严重致病菌。O157型是STEC中致病力最强、流行趋势最广及发病率最高的血清型，感染100 CFU O157 STEC就能致病，病患接触者也能引起继发感染，可引起人类腹泻、出血性结肠炎(hemorrhagic colitis, HC)，溶血性尿毒综合征(hemolytic uremic syndrome, HUS)，甚至死亡[1]。近年来，非O157型STEC中一些高致病力菌株对人类的健康也存在严重威胁，多达200多种的非O157菌株与人类疾病相关，如O111、O26、O45、O103等[2]。目前世界范围内对STEC仍缺乏有效的控制手段[3-4]。

对食源性致病菌大肠杆菌的检测未达到分型，检测后对致病菌的产毒情况缺乏了解，这给公共食品卫生和人类生命安全带来了极大的威胁。……