任艳萍，谢亮亮，李海艳，石德顺*，李湘萍*

(1.广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 530004； 2.遵义医学院基础医学院，遵义 563003)



转PRL基因小鼠遗传性状分析

任艳萍1，2，谢亮亮1，李海艳1，石德顺1*，李湘萍1*

(1.广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 530004； 2.遵义医学院基础医学院，遵义 563003)

本研究以原核注射法生产的乳腺特异性表达PRL基因小鼠为模型，从外源基因遗传完整性、拷贝数和插入位点3方面对其进行遗传性状分析，为今后大型转基因动物的选育提供基础。采用基因组DNA PCR方法筛选发生外源基因片段部分缺失的小鼠，并进行Southern blot验证，以检测外源基因的遗传完整性；用绝对荧光定量PCR方法测定外源基因拷贝数，用Genome walking方法分析外源基因整合位点。结果显示，外源基因片段部分缺失率为1.91%；整合十几个拷贝外源基因的小鼠在便携UV灯下可见绿色荧光，整合2个拷贝的小鼠无绿色荧光；在NW_001073945.1序列的2 025～2 026 bp和NW_001030574.1序列的10 760 020～10 760 021 bp处插入的外源基因可正常表达。以上结果说明，外源PRL基因在原核注射法生产的转基因小鼠中可稳定遗传；在一定范围内，外源基因的表达量与拷贝数呈正相关；附近无其他基因的外源基因插入位点有利于外源基因的表达。

转基因动物；遗传性状；原核注射；外源基因插入位点；拷贝数

转基因动物技术在基础生物学、医学、发育生物学、药物开发及繁殖育种等领域中应用较广泛，常用的转基因动物方法包括原核注射法[1]、体细胞核移植法[2]、精子载体法[3]、逆转录病毒感染法[4]等。……