刘晓玲，杨丽娜，倪晓霞，王庆芬，陈锦珊

(解放军第一七五医院　厦门大学附属东南医院制剂科，福建 漳州　363000)



高效液相色谱法测定盐酸丁卡因注射液中盐酸丁卡因的含量及有关物质

刘晓玲，杨丽娜，倪晓霞，王庆芬，陈锦珊

(解放军第一七五医院厦门大学附属东南医院制剂科，福建 漳州363000)

目的建立高效液相色谱法测定盐酸丁卡因注射液中盐酸丁卡因含量及有关物质检查的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相A和B为0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液[用稀磷酸或三乙胺调节pH值至(3.0±0.1)]和甲醇(70∶30)，梯度洗脱，流速为1.0 mL·min-1，柱温30 °C，盐酸丁卡因含量测定检测波长310 nm，有关物质检测波长为280 nm，进样量为20 μL。结果盐酸丁卡因在10.0～100.0 mg·L-1范围内线性良好(r=0.999 9)，平均回收率为98.73%，RSD值为0.72%(n=9)。结论该方法精密度高、准确可靠，可用于盐酸丁卡因注射液质量控制。

丁卡因/分析;色谱法,高压液相

盐酸丁卡因注射液临床上常用于表面麻醉、神经传导阻滞及椎管内阻滞,收载于《中国人民解放军医疗机构制剂规范》(2002年版)[1](以下简称《制剂规范》)。《制剂规范》及有关文献[2-3]中采用电位滴定法、紫外-可见分光光度法与双相中和滴定法测定盐酸丁卡因含量。紫外法测定过程中吸光度值不稳定，双相中和法在滴定分析过程中水层与氯仿层易发生乳化现象、终点突跃不明显。盐酸丁卡因含有酯键,结构不稳定,在H+、OH-或广义酸碱的催化下易发生水解，产生对丁氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸等杂质。为了加强盐酸丁卡因注射液的质量控制，笔者参考相关文献[4-6]，建立高效液相色谱法测定盐酸丁卡因含量，并对有关物质进行检查，现报道如下。

1　仪器与试药

Agilent 1200 Series高效液相色谱仪；分析天平 AUX220(SHIMADZU)；实验室超纯水系统U-S15；超声波清洗机(北京天鹏新技术有限公司)；甲醇(HPLC/spectro，TEDIA COMPANY，MS1922-801)；盐酸丁卡因对照品 (中国药品生物制品鉴定所，100456-200301)；对氨基苯甲酸对照品(中国药品生物制品鉴定所，100017-200509)；对丁氨基苯甲酸对照品(中国药品生物制品鉴定所，101183-201001)盐酸丁卡因注射液(本院制剂室配制，批号：20150127，南制字(2006)B25008)；其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件Agilent ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm，流动相A为0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液[用稀磷酸或三乙胺调节pH值至(3.0±0.1)] -甲醇(70∶30)，流速为1.0 mL·min-1，柱温30 °C，流动相B为甲醇，检测波长310 nm，进样量为20 μL，按下表进行梯度洗脱。

表1　梯度洗脱表

2.2对照品溶液配制精密称取105 ℃干燥至恒重的盐酸丁卡因对照品0.010 00 g，置100 mL容量瓶中，加水溶解、摇匀定容，即得浓度为100 mg·L-1的对照品储备液。

2.3供试品溶液配制精密量取样品溶液5.0 mL，置100 mL容量瓶中，加水定容，继续精密量取上述溶液10.0 mL,置100 mL容量瓶中，摇匀，加水定容，经0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。

2.4系统适应性试验在上述色谱条件下，取对照品溶液、供试品溶液(批号：20150127)分别进样20 μL，记录色谱图。结果表明： 在310 nm处供试品溶液中盐酸丁卡因保留时间为14.714 min，基线稳定，见图1。

图1　盐酸丁卡因含量测定色谱图

2.5线性关系与回归方程分别量取盐酸丁卡因储备液适量于洁净10 mL量瓶中，依次用水稀释为每1 mL中含盐酸丁卡因10.0、30.0、50.0、70.0、100 μg，按上述色谱条件分别进样，记录色谱图。以盐酸丁卡因质量浓度(X)为横坐标；峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，得盐酸丁卡因的线性回归方程Y=80.488 1X-57.427 7(r=0.999 9)，结果表明：盐酸丁卡因的质量浓度在10.0～100.0 mg·L-1范围内与峰面积线性关系良好，方法可行。

2.6精密度试验取对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，记录峰面积，结果得盐酸丁卡因峰面积RSD为0.060%，表明方法精密度良好。

2.7重复性试验取盐酸丁卡因注射液(批号：20150127)，按2.3项下样品供试液的制备方法制备供试品溶液6份，按上述色谱条件连续进样，按外标法计算含量。结果平均含量为0.91%，RSD为0.035%(n=6)。

2.8稳定性试验取同一批盐酸丁卡因注射液(批号为20150127)，按2.3项下供试品溶液配制方法配制供试品溶液，分别于1、2、3、4、5、6 h时，按上述色谱条件进样，记录盐酸丁卡因的峰面积，结果得盐酸丁卡因峰面积RSD为0.032%(n=6)，表明样品的稳定性良好。

2.9回收率试验取盐酸丁卡因注射液(批号：20150127)，按2.3方法配制供试品溶液，精密量取供试液5.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，共9份；取2.2项下对照品溶液，分别精密量取2.0、2.5、3.0 mL于上述10 mL量瓶中，配制成80%、100%和120%浓度的样品溶液各3份。按上述色谱条件进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，结果见表2。

表2　加样回收率实验结果

2.10样品含量测定取3批样品(批号为150127、140918(冷藏)、140918)，按2.3项下供试品溶液配制方法配制供试品溶液，按上述色谱条件分别进样，记录色谱图，按外标法计算含量，结果见表3。

表3　盐酸丁卡因注射液含量测定结果(n=3)

3　有关物质检查

精密称取对氨基苯甲酸、对丁氨基苯甲酸对照品0.01000 g、0.01070 g，分别置于50 mL量瓶中，用水溶解定容，即得200.0、214.0 mg·L-1的储备液。分别精密量取2.2项下的盐酸丁卡因及上述对氨基苯甲酸、对丁氨基苯甲酸对照品溶液各1 ml于10 mL容量瓶中，加水定容作为系统适用性溶液；另取批号为20140918(冷藏)、20140918、20150127三个批次产品，照2.3项下方法配制三个供试品溶液，分别注入液相色谱，以280nm作为检测波长，进样，结果显示盐酸丁卡因与两个有关物质完全分开，如图2所示。

4　讨论

4.1检测波长的选择取盐酸丁卡因对照品溶液、对氨基苯甲酸对照品溶液及对丁氨基苯甲酸溶液进行紫外可见光(200～400 nm)扫描，盐酸丁卡因在310 nm处有最大吸收，以上两个有关物质分别在275 nm和295 nm有最大吸收，笔者参考有关文献[7-8]与中国药典[9]，最后采用310 nm、280 nm双波长测定。

注：1.对氨基苯甲酸；2.盐酸丁卡因；3.对丁氨基苯甲酸。

4.2流动相比例选择笔者先采用0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液[用稀磷酸或三乙胺调节pH值至(3.0±0.1)] -乙腈(70∶30)作为流动相，结果显示盐酸丁卡因出峰时间适宜(4.5 min)，但无法对有关物质进行监测，故采用上述梯度洗脱方法。

综上所述，本方法精密度高，结果准确可靠，可用于测定盐酸丁卡因注射液中的盐酸丁卡因的含量测定及有关物质监测，三批样品在有效期内有关物质均无检出，安全稳定。

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Determination of tetracaine hydrochloride and the related substances in Tetracaine Hydrochloride Injection by HPLC

LIU Xiaoling,YANG Lina,NI Xiaoxia,et al

(DepartmentofPharmacy,The175thHospitalofPLA,TheAffiliatedSoutheastHospitalofXiamenUniversity,Zhangzhou,Fujian363000,China)

ObjectiveTo establish an HPLC method for determining the content of tetracaine hydrochloride and the related substances in Tetracaine Hydrochloride Injection.MethodsHPLC was used.The analytical column was Agilent ZORBAX SB-C18(5 μm,4.6×250 mm),0.05 mol·L-1potassium dihydrogen phosphate solution[adjusted with phosphoric acid or triethylanune to pH(3.0±0.1)]and methanol(70∶30) were adopted as mobile phase using gradient elution with the flow rate of 1.0 mL·min-1.The detection wavelength was 310 nm for tetracaine hydrochloride,and 280 nm for the related substances.The column temperature was 30°C and the injection volume was 20 μL.ResultsThe good linear relationship of tetracaine hydrochloride ranged from 10.0 to 100.0 mg·L-1(r=0.999 9),and the average recovery was 98.73% with theRSDof 0.72%(n=9).ConclusionsThe method is reliable,accurate and can be used for the quality control of Tetracaine Hydrochloride Injection.

Tetracaine/analysis;Chromatography,high pressure liquid

王庆芬：女，主管药师，研究方向：药学管理、医院制剂，

E-mail:1018943143 @qq.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.09.012

2016-03-05，

2016-06-11)