赵建

（南阳医学高等专科学校 河南南阳 473000）

致病性大肠杆菌YZ-3的分离鉴定与耐药性分析

赵建

（南阳医学高等专科学校 河南南阳 473000）

目的：探讨致病菌YZ-3的分离鉴定与耐药性。方法：采集腹泻患者的粪便经细菌培养，生化鉴定，16s rRNA鉴定后分析其耐药性。结果：经生化鉴定及16s rRNA鉴定，显示所分离菌株为一株致病性大肠杆菌，能够导致人患腹泻，对很多药物存在耐药性。结论：对病原菌进行鉴定，并分析其耐药性，对于临床防治疾病具有重要作用。

致病性大肠杆菌 分离鉴定 耐药性

抗生素因长期在临床广泛使用，且在应用过程中存在一定不合理性，导致菌株产生明显耐药性，因此了解病原菌的生物学特性及其耐药性对于指导临床用药具有重要作用［1］。实验分离鉴定一株大肠杆菌，并分析其耐药性，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

南阳医专一附院消化科腹泻患者。

1.2 方法

无菌采集腹泻患者的粪便标本涂布接种到麦康凯培养基、伊红美蓝平板上，在37℃状态下培养18-24h；挑选伊红美蓝平板疑似大肠杆菌菌落接种到营养琼脂平板。

1.2.1 生化鉴定

将疑似大肠杆菌形态特征的细菌YZ-3进行蔗糖、水杨酸、D-木糖、硫化氢、卫矛醇、乳糖、麦芽糖、L-阿拉伯糖、甘露醇、间-肌醇、尿素酶、七叶苷水解、葡萄糖、山梨醇、吲哚、M-R、V-P、枸橼酸盐利用、明胶液化等生化实验。［1］

1.2.2 16s rRNA鉴定

对细菌DNA进行提取，将所提取的DNA 作为模板，进行PCR扩增，所用的引物是通用正向引物P1（5’-3’） AGAGTTTGATCC T G G C T C A G和通用反向引物P 2（5’-3’）G G T T A C C T T G T T ACGACTT。PCR反应条件：94℃，5min；94℃，3min；58℃，1min；72℃，1min；72℃，3min［2］。PCR产物经回收纯化后寄去上海生工测序。

1.2.3 药敏试验

对大肠杆菌耐药性进行分析，将分离纯化后的大肠杆菌，接种到3-5mLLB 液体培养基。经37℃状态持续培养12h。无菌棉签蘸取菌液将其均匀涂至M-H琼脂平板，自然晾干。将镊子夹取不同药敏纸片，并将其根据一定间隔贴至平板不同位置，两纸片间距需高于24 mm，纸片与平板边缘距离超过15mm，经37℃温箱持续培养 24h后观察其结果。将大肠杆菌 ATCC25922 用作标准菌株，分析药物敏感性，所选取药物为：青霉素、氨苄西林、哌拉西林、头孢噻肟、头孢噻呋、美罗培南、比阿培南、氨曲南、丁胺卡那、阿莫西林、庆大霉素、新霉素、头孢曲松、安普霉素、强力霉素、土霉素、红霉素、左旋氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、克林沙星、粘杆菌素、氟苯尼考、磷霉素［3］。

2 结果

2.1 培养特性

分离菌YZ-3麦康凯培养显示为红色、圆形、微凸、边缘整齐、表面较为光滑，湿润。经伊红美蓝培养显示为紫黑色，圆形状态，微凸起，边缘整齐，表面较为光滑，保持湿润，往往存在金属光泽。根据《伯杰氏手册》第九版将YZ-3初步确定为大肠杆菌。

2.2 16s rRNA 鉴定结果

经PCR 扩增大肠杆菌YZ-3 的16s rRNA 在1450bp左右产生特异性条带，与预期大小具有相符性。16s rRNA测序结果与NCBI菌株相比，分离菌YZ-3与大肠杆菌ATCC25922 同源性为100%。YZ-3为一株致病性大肠杆菌，能够使得动物与人类出现疾病。

2.3 药物敏感性试验

大肠杆菌YZ-3对于阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素、青霉素、安普霉素、克林沙星、环丙沙星、强力霉素、土霉素、红霉素、磷霉素、恩诺沙星、左旋氧氟沙星、氟苯尼考高度耐药，对于哌拉西林、比阿培南、粘杆菌素制度耐药，对于头孢曲松、美罗培南、头孢噻肟、氨曲南、丁胺卡那敏感。药敏试验中各种药物对大肠杆菌的抑菌圈直径如表1所示。

表1 药敏试验中各药物对大肠杆菌的抑菌圈直径（mm）

3 讨论

分离菌YZ-3革兰氏染色阴性，为中等大小，直杆菌，其两端为顿圆状，分布时有单个的，也有成对的，无芽胞，无可见荚膜。经麦康凯培养特点有红色、圆形、微凸状、边缘保持整齐、表面具光滑性，湿润性菌落，经伊红美蓝培养后则显示紫黑色，圆形，稍凸起，边缘保持整齐，表面具有光滑，湿润，往往存在金属光泽。根据形态学观察和生化试验显示与《伯杰氏手册》大肠杆菌的特点具有相符性［1］，初步鉴定后YZ-3为大肠杆菌。16s rRNA 测序表明YZ-3的 16s rRNA 序列与大肠杆菌ATCC25922 同源性为100%。

近年来，随着抗菌药物的广泛应用，细菌耐药性逐年增加，致使一些抗菌药物临床疗效降低。表1表明，大肠杆菌YZ-3对于阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素、青霉素、安普霉素、克林沙星、环丙沙星、强力霉素、土霉素、红霉素、磷霉素、恩诺沙星、左旋氧氟沙星等高度耐药。如何根据药敏结果合理使用抗生素，控制耐药性的不断上升，需要临床医师、临床药师和实验室人员的共同努力。

［1］东秀珠，蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册［M］. 第1版.北京东黄城北街16号：科学出版社，2001，64-65.

［2］Jagals， P.；Barnard， T.G.；Mokoena， M.M，etc.Pathogenic Escherichia coli in rural household container waters［J］.Water Science and Technology，2013，67（6）：3264-3266.

［3］隋素琴，尤兆雄，张瑞君，等.医院感染病原菌的分布及耐药性分析［J］.中华医院感染学杂志，2012，22（20）：4639-4641.

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A

1674-2060（2016）02-0187-01

赵建（1974—），女，讲师。