车前子多糖对人外周血来源的树突状细胞免疫活性的影响

2016-10-27鲁世绒

生物技术世界 2016年2期

关键词：车前子树突表型

鲁世绒

（广西医科大学广西南宁 530000）

车前子多糖对人外周血来源的树突状细胞免疫活性的影响

鲁世绒

（广西医科大学广西南宁 530000）

目的：探讨车前子多糖对树突状细胞免疫活性的影响。方法：从健康人外周血获得单个核细胞，贴壁后的单核细胞加入GM-CSF、IL-4诱导为成熟的树突状细胞，在诱导过程中加入不同浓度车前多糖（PSP）作比较，用倒置显微镜及流式检测其细胞形态、表型变化。结果：各组经不同浓度PSP作用后，细胞表面CD80、CD86表达升高，在PSP作用浓度为40ug/ml时，表面分子表达量明显高于其他对照组。结论：在体外培养时，车前子多糖能促进树突状细胞的成熟。

车前子多糖树突状细胞免疫活性

前言

DC是生物体内功能最强的一种抗原提呈细胞，在机体免疫调控中发挥重要作用［1］。有关DC的免疫治疗已有大量报道，各种免疫疗法对肿瘤患者产生一定影响。研究表明许多中药有效成分具有一定的免疫调节活性，本文探究了车前子多糖在体外促进DC成熟，为研究车前子多糖免疫调节机制提供了理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与药物

淋巴细胞分离液购自北京索莱宝公司，rhGM-CSF 、rhIL-4，购自德国R&D 公司，FITC标记的鼠抗人CD80单抗、PE标记的CD86单抗购自BD-PharMingen，药材取自江西。

1.2 主要方法

1.2.1 外周血单核细胞分离

采取健康人外周血200ml，用同等比例PBS稀释后加入淋巴细胞分离液，1500rpm，20min离心，分为四层：血清、白膜层、淋巴分离液、红细胞［2］。取白膜层单个核细胞于离心管中，用PBS洗两次，用无血清的RPM1640重悬细胞，贴壁1h，取贴壁的细胞即单核细胞进行计数。

1.2.2 DC的体外诱导分化及培养

将单核细胞分为两组，车前子多糖组和对照组，加入完全1640，同时加入GM-CSF 1000 u/ml 、IL-4 450u/ml ，铺于六孔板中，PSP组分为五个作用浓度（10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、60ug/ ml）。

2 DC的鉴定

2.1 DC形态的观察

用倒置显微镜观察细胞形态。

2.2 DC表型的鉴定

采用流式细胞仪，在D C培养的第1 0天，收集细胞分别加入CD80，CD86单抗染色，室温避光作用15min。加PBS洗两次后用500ulPBS重悬细胞检测。

3 结果

c o n t r o l 　C D 8 0 　C D 8 6 c o n t r o l 　1 8 　7 2 . 1 　6 0 . 3 P S P 1 0 u g / m l 　1 0 　8 1 . 6 　7 8 . 9 P S P 2 0 u g / m l 　1 5 　8 5 . 3 　8 2 . 1 P S P 4 0 u g / m l 　1 7 　8 9 . 0 　8 6 . 2 P S P 6 0 u g / m l 　0 6 　5 1 . 3 　6 2 . 7

3.1 DC形态的改变

d1天细胞体积较小，d2天细胞开始聚集，部分悬浮。d3天细胞体积变大，形状变为树突状或放射状等。d4天大量细胞悬浮且呈突刺状。d7天可见大量突刺状细胞，为典型的DC形态。

3.2 DC的免疫表型分析

各组细胞共培养7d，流式检测其表型，结果见下表。

组间表达：各组DC分子表面CD80、CD86均有表达，车前子多糖作用组均高于对照组。但当PSP浓度高于40ug/ml时，CD80、CD86的表达呈下降趋势。

组内表达：当PSP浓度≤40ug/ml时，随着PSP的增加，DC表面分子表达增加。当60ug/ml浓度时，表面分子表达降低。

各浓度PSP组及对照组流式检测结果%