岳耀稳 王丽萍 张仲友

摘要 通过常规分离方法、平板对峙培养法从健康烟株的根、茎、叶中分离得到内生细菌127株，从中筛选出8株菌株对烟草黑胫病菌有明显抗性，并对其进行了皿内拮抗试验、发酵液抑菌试验、温室盆栽试验和发酵液浸种、灌根试验，结果表明：8个菌株培养液滤液中存在具有明显抑菌作用的活性成分。以菌株wy11对烟草黑胫病的防效最好，防效为51.7%。菌株wy2发酵液浸种对烟草幼苗有显著促生作用，能显著提高地上部分鲜重、茎围、根长、叶长、叶宽。

关键词 烟草黑胫病病原菌；内生细菌；分离鉴定；促生作用

中图分类号 S435.72 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）09-0120-03

烟草黑胫病是土传真菌病害，在我国各产烟省均有不同程度的发生[1]。筛选有益的内生细菌有可能成为生物防治中有潜力的微生物农药、增产菌等加以利用[2]。因此，通过对皖南各烟区大量采样，分离出多种内生细菌，筛选出有效的黑胫病拮抗菌株，并对其促生作用进行研究。

1 材料与方法

1.1 供试烟草品种及菌株

内生细菌为云烟87、云烟97、云烟99、K326共4个品种的烟草植株成熟期的根、茎及不同生长期的叶片等组织进行采样并分离获得。菌株为烟草黑胫病（病原）菌162。

1.2 主要试剂及培养基

内生细菌DNA提取、16S rDNA片段扩增、Marker、dNTPs、Buffer等试剂为宝生物工程（大连）产品；其余试剂均为国产分析纯。内生细菌分离和培养用改良的NA（牛肉浸膏1.0 g，酵母浸出汁3.0 g，琼脂17.0 g，大豆蛋白胨5.0 g，NaCl 5.0 g，蒸馏水1 000 mL，pH值7.0）、液体培养用LB，烟草黑胫病菌的培养用CA[3]。

1.3 烟草内生细菌的分离、纯化、保存、编号规则