王炳高　袁新颜　邢志博　王凤梅　侯红　张艳辉

青岛市中心（肿瘤）医院乳腺外科，青岛266042

三阴性乳腺癌组织STAT3、AR、MMP-13表达与预后状况的关系研究

王炳高#袁新颜邢志博王凤梅侯红张艳辉

青岛市中心（肿瘤）医院乳腺外科，青岛266042

目的探讨三阴性乳腺癌组织中信号转导因子及转录活化因子3（STAT3）、雄激素受体（AR）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）表达与预后状况的关系。方法选取三阴性乳腺癌患者组织180例作为研究组，同期选取行乳腺纤维腺瘤切除术患者正常乳腺组织160例作为对照组，采用免疫组织化学SP法检测STAT3、AR、MMP-13表达情况。结果研究组STAT3、AR、MMP-13阳性表达率明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。STAT3、AR、MMP-13评分与TNM分期、腋窝淋巴结转移呈正相关（P＜0.05），与组织学分化程度呈负相关（P＜0.05）。经Cox多因素分析显示，STAT3、AR、MMP-13阳性表达与TNM分期、组织学分级、淋巴结转移均为TNBC患者预后的影响因素。结论三阴性乳腺癌组织STAT3、AR、MMP-13阳性表达明显增高，且可能与临床病理特征与预后状况具有紧密的关系。

三阴性乳腺癌；STAT3；AR；MMP-13；预后

Oncol Prog，2016，14（6）

三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）是指人表皮生长因子受体-2（human epithelial growth factor receptor-2，HER-2）、孕激素受体（progestrone receptor，PR）与雌激素受体（estrogen receptor，ER）表达阴性的乳腺癌类型，其具有易转移与侵袭性等病理特点，预后差。目前缺乏针对HER-2、PR、ER等受体的有效内分泌治疗与生物靶向治疗［1］，临床尚无有效的治疗手段。本研究通过探讨TNBC组织信号转导因子及转录活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3， STAT3）、雄激素受体（androgen receptor，AR）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）表达与预后状况的关系，以探寻TNBC患者的发病机制，分析可否作为TNBC患者新型分子标志物与治疗靶向标志物，从而改善TNBC患者的临床疗效与预后状况，现报道如下。

1　资料与方法

1.1临床资料

选取青岛市中心（肿瘤）医院2012年3月至2013年3月收治的TNBC患者组织180例作为研究组，年龄32～73岁，平均年龄（49.03±5.15）岁。纳入标准：女性，全部患者均符合三阴性乳腺癌的病理组织学诊断标准［2］，自愿参加本研究试验并签署知情同意书。排除标准：合并肝肾功能障碍，心肺功能不全与精神性疾病患者。同期选取我院行乳腺纤维腺瘤切除术的160例患者正常乳腺组织作为对照组，均经病理组织学检查证实为正常乳腺组织，年龄31～72岁，平均年龄（48.97±5.08）岁。两组患者年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2检测方法

SP试剂盒购自福建迈新生物技术有限公司，"HW＞W%兔抗人单克隆抗体购自英国Abcam公司，AR兔抗人单克隆抗体（cell signaling technology）、兔抗人MMP-13多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，DAB底物显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。全部组织标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，采用免疫组织化学SP法检测三阴性乳腺癌组织与正常乳腺组织STAT3、AR、MMP-13蛋白表达，严格按照试剂盒说明书操作，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3观察指标

采用半定量积分法，随机选取5个视野，总计数200个细胞。阳性染色强度评分：无染色为0分，微弱染色为1分，清晰染色且细胞质或细胞核呈棕黄色为2分，细胞质与细胞核呈深棕色为3分；阳性细胞数评分：无阳性细胞为0分，阳性细胞数≤20%为1分，阳性细胞数21%～50%为2分，阳性细胞数＞50%为3分；上述两项评分相乘，0～2分为阴性，≥3分为阳性表达。

1.4统计学方法

采用SPSS18.0统-计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用两独立样本t检验，两组间的计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关系数检验，TNBC患者预后影响因素采用Cox比例风险回归模型分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

2.1两组患者STAT3、AR、MMP-13阳性表达率比较

研究组STAT3、AR、MMP-13阳性表达率明显高于对照组，两组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）（表1），研究组STAT3、AR、MMP-13阳性表达情况见图1。

表1　两组患者STAT3、AR、MMP-13阳性表达率比较［n（%）］

图1　TNBC患者组织中STAT3、AR、MMP-13阳性表达情况（SP×200）

2.2STAT3、AR、MMP-13表达与TNBC临床特征的关系

STAT3、AR、MMP-13表达与TNBC患者TNM分期、组织学分化程度及腋窝淋巴结转移具有相关性，其中与TNM分期、腋窝淋巴结转移呈正相关（P＜0.05），与组织学分化程度呈负相关（P＜0.05）。（表2）

表2　STAT3、AR、MMP-13评分与TNBC临床特征的相关性分析（r）

2.3TNBC患者预后影响因素的Cox多因素分析

经Cox多因素回归分析显示，STAT3、AR、MMP-13阳性表达与TNM分期、组织学分级、淋巴结转移均为TNBC患者预后的影响因素（P＜0.05），其中STAT3、AR、MMP-13阳性表达与高TNM分期级别、伴有淋巴结转移是TNBC患者预后的独立危险因素，高组织学分级是TNBC患者预后的保护因素。（表3）

3　讨论

TNBC约占乳腺癌的15%，其具有淋巴结转移早、复发率高与侵袭性强等特点［3］。因此，TNBC的预后状况欠佳。TNBC的病理机制尚未完全阐明，因此增加了TNBC患者的治疗难度［4］。探明TNBC的病理机制有助于准确评估预后状况，同时，通过探寻具有诊治价值的TNBC分子标志物在指导治疗靶点中具有重要的价值［5］。

STAT3是人类胚胎期干细胞自我更新的主要基因之一，在癌症组织中激活［6］。因此，STAT3在肿瘤干细胞自我更新与自我维持中发挥主要作用，并可作为肿瘤干细胞调控的重要基因。被激活的STAT3基因通过介导多种基因表达，从而促进肿瘤细胞转移、增殖，抑制肿瘤细胞凋亡与抗肿瘤免疫应答反应等。相关文献证实，STAT3与恶性肿瘤患者的预后状况具有明显的关系［7］。另有文献报道显示，被激活的STAT3通过促进肿瘤干细胞增殖与抑制肿瘤干细胞分化，通过抑制STAT3表达而发挥阻碍肿瘤干细胞生长的作用［8］。结合本研究结果，STAT3过表达可作为TNBC及预后状况的危险因素。

表3　TNBC患者预后影响因素的Cox多因素分析

乳腺癌是激素依赖性肿瘤，乳腺癌细胞均呈阳性表达。相关文献证实，AR通路是TNBC病理形成的重要环节［9-11］。本研究结果显示，AR在TNBC组织中的表达显著增高，且与TNM分期、组织学分化程度及腋窝淋巴结转移具有紧密的关系，有望成为TNBC患者预后的重要评估指标。

MMP-13是MMP家族成员之一，其在肿瘤转移浸润期间发挥重要的作用。作为锌依赖性蛋白酶超家族，MMP家族成员可降低细胞外基质的基底膜与蛋白成分［12］。因此，MMP在间质细胞中的过表达与恶性肿瘤病情进展之间具有一定的关系。MMP-13通过降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅹ型胶原纤维，原纤维蛋白，蛋白多糖与纤维连接蛋白，在基底细胞癌、皮肤癌、结直肠癌与瘢痕癌中过表达，且与癌组织的生物学行为及其预后具有一定的关系［13］。本研究结果表明，MMP-13在TNBC组织中显著高表达，提示MMP-13在TNBC的病情发展中发挥重要的作用。同时，TNMⅢ～Ⅳ期、低组织学分化程度与有腋窝淋巴结转移的患者MMP-13阳性表达率可能更高。结合Cox多因素回归分析结果，MMP-13阳性表达提示预后状况欠佳，其与相关文献具有一致性［14］。STAT3、AR、MMP-13阳性表达与TNM分期、组织学分级、淋巴结转移均有关（P＜0.05），TNM分期越高，组织学分化程度越低，有腋窝淋巴结转移患者STAT3、AR、MMP-13阳性表达率越高。而TNM分期、组织学分级、淋巴结转移是公认的影响预后的因素，且受到众多因素的影响。乳腺癌多种生物学特征均可能对生存具有重要的影响，STAT3、AR、MMP-13蛋白表达对生存的影响程度尚有待进一步的研究探讨。因此，STAT3、AR、MMP-13等多种基因网络与信号传导通路可能共同参与TNBC的病理形成，探寻TNBC信号传导通路及其相互间的关联有助于加深TNBC病理原因的认识。

综上所述，三阴性乳腺癌组织STAT3、AR、MMP-13阳性表达明显增高，且与临床病理特征及预后状况具有紧密的关系。

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Correlation between STAT3，AR，MMP-13 expression and prognosis in triple negative breast cancer

WANG Bing-gao#YUAN Xin-yan XING Zhi-bo WANG Feng-mei HOU Hong ZHANG Yan-hui
Department of Breast Surgery，Qingdao Central Hospital，Qingdao 266042，China

ObjectiveTo study the correlation between the expression of signal transducer and activator of transcription 3（STAT3），androgen receptor（AR），matrix metalloproteinase-13（MMP-13）expression in triple negative breast cancer（TNBC）tissues and the prognosis.Method180 patients with TNBC were enrolled as study group，while another 160 patients with normal breast tissue and had breast fibroadenoma resection during the same period were included as control group；Immunohistochemical SP method was applied to detect the expression level of STAT3，AR，and MMP-13. ResultThe positive expression rate of STAT3，AR and MMP-13 in the study group was significantly higher than that in the control group（P＜0.05）.Besides，STAT3，AR，and MMP-13 scores were positively correlated with TNM stage，and axillary lymph node metastasis（P＜0.05），though negatively correlated with histological differentiation（P＜0.05）.In Cox multivariate analysis，the positive expression of STAT3，AR，and MMP-13，TNM stage，histological grade，and lymph node metastasis were all factors influencing the prognosis of TNBC patients.ConclusionThe positive expression of STAT3，AR and MMP-13 was significantly increased in the triple negative breast cancer tissues，which may be closely related to the clinicopathological characteristics and prognosis.

triple negative breast cancer；STAT3；AR；MMP-13；prognosis

R737.9

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.06.29

2016-02-23）

（corresponding author），邮箱：wbgqd1965@126.com