帕提曼·米吉提唐努尔·阿不力米提古扎努尔·阿布都西库尔古扎丽努尔·阿不力孜

新疆医科大学附属肿瘤医院妇外五科，乌鲁木齐830054

HPV16-E6-DNA病毒载量对预测宫颈癌患者生存状况的影响

帕提曼·米吉提唐努尔·阿不力米提古扎努尔·阿布都西库尔古扎丽努尔·阿不力孜#

新疆医科大学附属肿瘤医院妇外五科，乌鲁木齐830054

目的探讨宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型致癌基因E6（HPV16-E6-DNA）的病毒载量对预测宫颈癌患者生存状况的影响。方法选取126例宫颈癌患者为研究对象，提取宫颈癌组织DNA，利用荧光定量PCR技术检测宫颈癌组织中HPV16-E6-DNA病毒载量，根据检测的HPV16-E6-DNA载量将患者分为低载量组（＜106copy/ng）与高载量组（≥106copy/ng）。采用Kaplan-Meier法计算两组患者的生存率，采用Cox回归对影响患者5年生存率的因素进行分析。结果比较两组患者间一般资料特征，年龄、FIGO分期及淋巴结转移情况，差异有统计学意义（P＜0.05）。Kaplan-Meier生存率分析显示，低载量组患者1年、3年及5年生存率分别为95.67%、89.32%和74.29%，高载量组患者1年、3年及5年生存率分别为89.09%、62.60%和51.37%，低载量组高于高载量组，两组差异均有统计学意义（P＜0.01）。Cox多因素回归分析结果显示，HPV16-E6-DNA病毒载量及淋巴结转移是影响宫颈癌患者预后的主要因素。结论HPV16-E6-DNA病毒载量与宫颈癌患者的远期预后密切相关，可作为术后宫颈癌患者预后的预测因子。

宫颈癌；人乳头瘤病毒；预后

Oncol Prog，2016，14（6）

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在发展中国家，占生殖系统恶性肿瘤的第一位，严重危害女性的健康［1］。高危型人乳头状瘤病毒（high-risk human papillomavirus，HR-HPV）持续感染被公认为是引起宫颈癌的必要病因。致癌基因E6是HPV16型的早期基因，其病毒载量及所编码的蛋白与宫颈癌的发生密切相关［2］。本研究对126例宫颈癌患者的HPV16-E6-DNA载量进行检测，分析其对患者生存状况的预测价值。

1　对象与方法

1.1研究对象

选取2009年1月至2010年1月于新疆医科大学附属肿瘤医院采取宫颈癌根治术治疗的126例宫颈癌患者为研究对象，年龄26～79岁，平均年龄（56.4±7.8）岁。纳入标准：①患者初始治疗均选择宫颈癌根治术；②病理组织活检确诊为宫颈癌，凯普HPV分型法检测法确定HPV16感染阳性；③妇产科联盟（FIGO）对宫颈癌分期为Ib～IIa；④随访资料完整；⑤患者及家属对本研究知情同意。排除未到达随访终止时间或事件失访的患者。126例患者中，鳞癌109例，腺癌17例；组织学分化程度低分化23例，中分化45例，高分化58例。

1.2HPV16-E6-DNA载量检测及分组

首先提取患者宫颈癌变组织中的DNA，采用Qiagen DNA提取试剂盒（德国QIAGEN公司生产）对冻存宫颈组织中的DNA进行提取，操作步骤严格按照试剂盒说明书，DNA溶液-80℃冷藏备用。采用实时荧光定量PCR测定HPV16-DNA-E6载量，引物由大连宝生物工程公司合成（引物编号LZDl74），引物序列如下：

HPV16-DNA-E65'-GCAAGCAACAGTTACTGCGACGT-3'（nt201-223）5'-GCAACAAGACATACATCGACCGG-3'（nt501-523）

使用pUCm-T/HPV16-E6质粒（南京金斯瑞生物科技有限公司）制备标准品，检测标准品和待测样品的HPV16-E6基因，从而得出DNA相对含量，每个样品重复3次，取平均值。将HPV16-E6-DNA载量＜106copy/ng患者分为低载量组（n=71），载量≥106copy/ng患者为高载量组（n=55）。

1.3观察指标

从确诊之日起进行随访，前2年每6个月随访1次，以后每12个月随访1次，随访采用门诊或电话随访的形式。随访初共138例患者，随访期间12例患者失访，最终126例患者纳入研究。以患者死亡、随访截止作为随访结束点。分析比较两组患者间临床资料，观察两组患者1年、3年及5年的生存率。

1.4统计学方法

采用SPSS 19.0软-件对本研究数据进行统计学分析，计量资料以（±s）表示，采用t检验；计数资料用率（%）表示，组间比较采用χ2检验，采用Kaplan-Meier法进行生存分析，Log-rank法进行组间对比，采用Cox回归对影响患者5年生存率的因素进行分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

单因素卡方检验显示年龄、FIGO分期、宫旁浸润及淋巴结转移情况与载量相关（P＜0.05）；组织学分化程度、病理类型、肿瘤直径、病灶类型和深肌层浸润与载量无关（P＞0.05）。（表1）

2.2病毒载量对生存状况的影响

低载量组患者1年、3年及5年生存率分别为95.67%、89.32%及74.29%，高载量组患者1年、3年及5年生存率分别为89.09%、62.60%及51.37%，低载量组高于高载量组，差异有统计学意义（χ2= 8.539，P=0.004）。（图1）

表1　126例患者HPV16-E6-DNA病毒载量与临床特征的关系

2.3宫颈癌患者生存状况的影响因素分析

采用Cox回归分析对影响宫颈癌患者5生存率的因素进行分析，结果显示，HPV16-E6-DNA病毒载量及淋巴结转移是影响宫颈癌患者预后的主要因素（P＜0.05）。（表2）

3　讨论

图1　不同HPV16-E6-DNA病毒载量患者生存曲线

HR-HPV持续感染是宫颈癌及宫颈病变发生发展的必要条件［3］，HR-HPV感染状态与宫颈癌的进展密切相关，HR-HPV阳性的CNI-I者向高度鳞状上皮内瘤变进展的风险高于阴性者，而且随着随访时间的延长，进展的风险逐渐增大［4］。在对非典型性鳞状细胞患者疾病的进展情况的监测过程中，HR-HPV-DNA检测优于重复细胞学检查，病毒载量与宫颈病变严重程度相关［5］。流行病学调查显示，HPV16型是我国女性最为常见的感染类型［6-7］。致癌基因及其所编码蛋白在宫颈癌的发病机制和早期诊治的作用而倍受关注，高危型HPV癌基因E6对于恶性肿瘤的转化和生长起重要作用，其在宫颈癌发病机制中的作用成为目前学者们研究的热点［8］。HPV16与50%以上的宫颈癌发生发展密切相关，其E6癌蛋白是病毒生命周期的主要蛋白之一，在诱导肿瘤发生与发展进程中起重要作用，且与病毒复制，宿主细胞周期调控，细胞凋亡，细胞增殖及细胞恶性表型转化有关，通过多种作用机制影响宫颈癌的发生和进展［9-11］。本研究提取患者宫颈组织中的DNA，利用荧光定量PCR技术检测宫颈癌组织中HPV16-E6-DNA病毒载量，分析HPV16-E6-DNA病毒载量与宫颈癌病理学特征的关系及其对患者预后的预测价值。

表2　宫颈癌患者5年生存率影响因素分析

本研究结果显示，不同HPV16-E6-DNA载量患者间年龄、FIGO分期、宫旁浸润及淋巴结转移情况差异有统计学意义（P＜0.05）。这一结果说明HPV16-E6-DNA载量越高患者宫颈癌临床分期越严重、伴有宫旁浸润或淋巴结转移。亦有研究报道肿瘤直径，存在淋巴转移是影响患者预后的主要原因［12］。本研究Kaplan-Meier生存分析显示HPV16-E6-DNA低载量组患者1年、3年及5年生存率分别为95.67%、89.32%及74.29%，高于高载量组的89.09%、62.60%及51.37%，差异有统计学意义（P＜0.01）。国内有研究报道HPV16-E6-DNA病毒拷贝数＞107copy/ng组5年总生存率为39.4%，105～107copy/ng患者为44.0%，＜105copy/ng患者为86.3%，HPV16-E6-DNA病毒载量是宫颈癌根治性切除术后的总体生存率的独立预后因素，可作为宫颈癌根治性切除术后的预后预测因子之一［13］。进一步采用Cox回归对影响宫颈癌患者的5年生存率的因素进行分析，结果显示，HPV16-E6-DNA病毒载量及淋巴结转移是影响宫颈癌患者预后的主要因素，而淋巴结转移在大多数研究中报道其是影响患者预后的独立因素。

综上所述，HPV16-E6-DNA病毒载量与宫颈癌患者的远期预后密切相关，对评估术后宫颈癌患者的预后有指导作用，但尚需要多中心大样本的研究进一步确定。

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The effect of HPV16-E6-DNAviral load on the survival of patients with cervical cancer

MIJITI Patiman ABULIMITI Tangnuer ABUDUXIKUER Guzhanuer ABULIZI Guzhalinuer#
Department of 5th Gynecological Surgery，Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，Xinjiang，China

ObjectiveTo investigate the predictive value of oncogenes E6 of human papillomavirus type 16（HPV16-E6-DNA）on the survival of patients with cervical cancer.Method126 patients with cervical cancer were included in the study，and the cervical cancer DNA were extracted from cervical tissues.Viral load of HPV16-E6-DNA were detected by fluorescence quantitative PCR，and then patients were stratified as low load group（HPV16-E6-DNA＜106copy/ng）and high load group（HPV16-E6-DNA≥106copy/ng）according to the PCR results.Survival rate was calculated by Kaplan-Meier，and the factors affecting the 5-year survival were analyzed by Cox regression analysis.ResultAge，FIGO stage and lymph node metastasis in the two groups were statistically different，which were of statistically significance（P＜0.05）.Kaplan-Meier survival analysis showed that，1-，3-and 5-year survival rates of low load group were 95.67%，89.32%and 74.29%，and were 89.09%，62.60%，51.37%in high load group，respectively，and the difference was statistically significant（P＜0.01）.Cox multivariate regression analysis showed that，HPV16-E6-DNA viral load and lymph node metastasis were the main prognostic factors in patients with cervical cancer.ConclusionHPV16-E6-DNA viral load was closely associated with the long-term prognosis of patients with cervical cancer，which is useful in predicting the postoperative prognosis in those patients.

cervical cancer；human papillomavirus；prognosis

R737.33

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.06.14

2015-12-18）

（corresponding author），邮箱：gzlnr@qq.com