杨志军　白妙春　张业森　郭永坤　戴宜武



·论著·

Tf-USPIO纳米微粒的合成及TfR转基因神经干细胞过表达的研究

杨志军白妙春张业森郭永坤戴宜武

目的合成Tf-USPIO纳米微粒以及建立稳定表达TfR的神经干细胞。方法利用慢病毒转染神经干细胞，通过流式细胞仪筛选出稳定表达TfR的神经干细胞，运用WB检测其表达水平。将Tf与USPIO进行偶联，合成Tf-USPIO纳米微粒，通过DLS方法测出USPIO和Tf-USPIO的直径分别为(36±0.7)nm，(43.5±0.08)nm。结果慢病毒成功的转染神经干细胞，通过流式细胞仪器筛选出稳定表达的神经干细胞，并用WB证实了TfR的过表达；通过偶联的方法合成了稳定的Tf-USPIO微粒。结论成功构建了TfR神经干细胞系，合成出稳定的Tf-USPIO纳米微粒。

超小超顺磁性氧化铁；转铁蛋白受体；慢病毒载体；干细胞；磁共振成像

研究证实神经干细胞移植可改善因神经元损伤而出现的临床症状[1]。但到目前为止，未能实现在活体内长期动态观察干细胞的迁移和分化，因此需要一种能够达到长期示踪目的的干细胞。转铁蛋白受体(transferring receptor,TfR)在内皮细胞等大量存在，其主要作用是将细胞外的铁向细胞内转移，是铁代谢的重要过程，其配体转铁蛋白(Tf)可透过血脑屏障(BBB)。同时, 研究发现脑内很多疾病的发生都和铁代谢失调有关。TfR报告基因在磁共振(MR)分子成像中受到高度重视和广泛关注。目前应用较多的 TfR 探针有转铁蛋白-单晶体氧化铁颗粒(Tf-MION)[2]和转铁蛋白-超顺磁性氧化铁纳米粒(Tf-SPION)[3]两种,其在体内外均能MR成像。本文利用慢病毒(pLenti6.3-TfR-IRES-EGFP和pLenti6.3-MCS-IRES-EGFP)转染神经干细胞(NSCs)，通过流式细胞筛选出稳定表达TfR的神经干细胞系，并通过蛋白印记(Western blotting)证明其过表达；……