徐天华，杨振海，陈 光，李远宏，高兴华，陈洪铎



在体共聚焦激光扫描显微成像检测黑眼圈患者下眼睑微血管数量的变化

徐天华，杨振海，陈 光，李远宏，高兴华，陈洪铎

徐天华

目的 通过在体共聚焦激光扫描显微成像活体检测患者眼睑黑眼圈颜色最深处的真皮内微血管数量的变化。方法 60例黑眼圈女性受试者和10名正常对照女性受试者入选本研究。根据年龄，分为A（21～30岁）和B（31～40岁）两组；每组又根据眼圈皮肤颜色分为青紫色组和棕黑色组两亚组，每亚组含4个小组：正常对照组、轻度组、中度组和重度组。所有受试者均行在体共聚焦激光扫描显微成像检查。结果 棕黑色和青紫色黑眼圈受试者在体共聚焦检测结果显示，中度组和重度组微血管计数均显著高于正常对照组，差异具有统计学意义。结论 下眼睑微血管数量增加，与黑眼圈严重程度成正相关，提示新生血管数量增加可能是黑眼圈形成的重要因素之一。

黑眼圈；微血管；共聚焦激光，在体

［J Pract Dermatol， 2016， 9（4）：250-252］

黑眼圈可分为两种颜色，一种是青紫色黑眼圈，另一种是棕黑色黑眼圈。黑眼圈由多种因素引起，其中先天性真皮黑素的沉积、炎症后色素沉着过度（主要是遗传性过敏症或过敏性接触性皮炎等［1，2］）是引起棕黑色黑眼圈的主要原因。青紫色黑眼圈多数认为是因为微血管的静脉血液滞留，血液流速缓慢，血液量增多，血氧饱和度下降［3］，从外表看来，皮肤就出现暗蓝色色调。故黑眼圈与微血管数量的相互关系是研究黑眼圈发病机制的重要切入点之一。本研究通过在体共聚焦激光扫描显微成像活体观察了黑眼圈患者下眼睑皮损处真皮内微血管的数量变化及其与黑眼圈级别和颜色的关系，为黑眼圈治疗提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 受试者

受试者均来自中国医科大学附属第一医院皮肤科门诊。入选标准：女性，年龄25～40岁；黑眼圈病史＞1年，且面部皮肤健康，眼周无雀斑、黄褐斑、太田痣及鹤青样痣，无湿疹或皮炎等疾病；无化妆品皮肤过敏史及其他严重过敏史；无系统性疾病者；自愿参加本试验并签署知情同意书。共60例黑眼圈患者、21～30岁和31～40岁各5名正常对照组女性受试者入选本研究。

1.2 方法

1.2.1 术前准备 受试者用清水及洗面奶/液清洗面部。温度20～25℃，湿度40%～50%的室内休息30 min。以提问方式获取受试者基本资料，建立个人档案。指定照像室照相，留取受试者正面双眼部照片。由未参与试验的3名医生根据受试者照片目测判断黑眼圈严重程度（0～10分），取平均值，1～3分为轻度，4～6分为中度，＞7分为重度。

根据年龄，分为A（21～30岁）和B（31～40岁）两组；每组又根据颜色分为青紫色组和棕黑色组两亚组。每亚组含4个小组：正常对照组、轻度组、中度组和重度组，每小组5例受试者。所有受试者均行在体共聚焦激光扫描显微成像检查。

1.2.2 实验步骤 患者取平卧位，选取右侧下眼睑正下方黑眼圈处皮肤进行低倍皮肤镜成像和皮肤CT成像。皮肤CT光源为830 nm的激光，输出功率为0～16 mW可调，横向分辨率为2 μm （XY水平方向），轴向分辨率为1.6 μm（Z轴方向），镜头为30倍水浸物镜，介质分别为蒸馏水（粘合窗与皮肤间）和超声胶（镜头和粘合窗间），扫描深度为300 μm以内的表皮层及真皮浅层组织。

图1 在体共聚焦激光扫描显微成像图真皮内微血管计数

1.2.3 指标评价 在体共聚焦激光扫描显微成像检测下眼睑正下方黑眼圈处的真皮内微血管数量，随机留取5个视野，由医生根据所检测图像进行计数，取均值。

1.3 统计学方法

所有数据采用S P S S 13.0软件包进行分析，P＜0.05认为有统计学意义。

2 结果

在体共聚焦激光扫描显微成像图像的真皮内微血管显示：A组（棕黑色为主）的所有年龄组别的轻度组与正常对照组相比，下眼睑的微血管计数无显著增加，差异无统计学意义；中和重度组与正常对照组相比，微血管计数均显著增加，差异具有统计学意义（图1）。重度黑眼圈患者下眼睑在体共聚焦激光扫描显微成像图像的真皮内微血管明显增多（图2）。B组（青紫色为主）的所有年龄组别的轻、中和重度组与正常对照组相比，下眼睑的微血管计数均显著增加，差异具有统计学意义；轻、中和重度各组间差异具有统计学意义（图1）。重度黑眼圈患者下眼睑在体共聚焦激光扫描显微成像图像的真皮内微血管明显增多（图2）。

3 讨论

图2 受试者面部在体共聚焦检测成像图（红色箭头示真皮内微血管）

黑眼圈分两种颜色，一种是青紫色黑眼圈，这是因为微血管的静脉血液滞留；另一种是棕黑色黑眼圈，因黑色素生成与代谢不全而产生，两种黑眼圈产生的原因完全不同。紫色黑眼圈通常发生在20岁左右，生活作息不正常的人尤难避免，主要是因为其微血管内血液流速缓慢，血液量增多而氧气消耗量提高，缺氧血红素大大增加的结果，从外表看来，皮肤出现暗蓝色调。由于眼睛周围有较多微血管，因此睡眠不足、眼睛疲劳、压力、贫血等因素，都会造成眼周肌肤淤血及水肿。棕色黑眼圈的成因则与年龄增长息息相关，长期日晒造成色素沉淀在眼周，久而久之就会形成挥之不去的黑眼圈；另外，血液滞留造成的黑素代谢迟缓，肌肤过度干燥，均会导致棕色黑眼圈的形成。总之，黑眼圈是由多重病源因素构成，包括真皮黑素的沉积，炎症后色素沉着过度，遗传性过敏症或过敏性接触性皮炎，眼眶周的水肿，脉管系统的表面位置，以及皮肤松弛导致的阴影等［4］。

Matsumoto等［5］发现下眼睑的皮肤微血管数量比面颊部多，血流速度比面颊部快。当皮肤温度下降时，皮肤血管收缩使皮肤血流停滞和血液淤积，下眼睑皮肤血氧饱和度明显下降，从而出现黑眼圈。Masuda等［6］应用手提式反射分光光度仪测量表明，有黑眼圈的人其下眼睑皮肤血氧饱和度明显低于无黑眼圈的人，其下眼睑皮肤黑色素和血红蛋白的含量增高。血红蛋白的含量增高引起不溶解的血红蛋白的代谢产物——含铁血黄素的蓄积。

共聚焦激光扫描显微成像是以激光做光源，经两次聚焦对活体组织进行扫描，同时将光信号转变为电信号传输至计算机，在屏幕上呈现出横切面的图像。并根据不同细胞对光线的折射率不同而显现出组织结构。扫描过程中根据细胞器和组织结构自身的折射率不同对图像加以分辨，如皮肤组织中黑色素和角蛋白具有较高的折射率，是自然对照物［7］。本研究选用共聚焦激光扫描显微成像检测代替黑眼圈部位组织活检，克服了离体检测的不准确性，直观的观察了活体的下眼睑的皮肤微血管数量。

本实验研究结果显示，棕黑色为主的黑眼圈受试者下眼睑的轻度组与正常对照组相比，微血管计数无显著增加，差异无统计学意义；中、重度与正常对照组相比，微血管计数均显著增加，差异具有统计学意义；青紫色为主的黑眼圈受试者下眼睑的轻、中和重度组与正常对照组相比，微血管计数均显著增加，差异具有统计学意义。

微血管增多可能与皮肤组织内血液流动速度减慢，皮肤组织内血液供应减少，皮肤组织相对处于缺血缺氧状态，缺血缺氧能够诱导上调HIF-la、MMP-2 和MMP-9的表达。HIF-1a存在于机体的所有细胞中，在正常情况下一旦分泌后会立即降解，在细胞处于缺氧环境下HIF-1a、β聚合使HIF-1a在细胞内聚集，其下游的相关基因被顺序启动。HIF-la下游靶基因众多，包括促红细胞生成素、血管内皮细胞生长因子、一氧化氮合酶、葡萄糖转运因子1、3-糖酵解酶等，它们的表达导致皮肤组织氧气运输能力增强、促进皮肤血管生成、皮肤细胞有氧代谢减慢及无氧代谢增强等，使得皮肤细胞在缺血缺氧环境中易于生存［8，9］。

推测黑眼圈组的下眼睑皮肤血流减少，皮肤血氧饱和度明显下降，促进皮肤血管生成，随着新生血管增多，血流停滞和血液淤积更加严重，加上不溶解血红蛋白代谢产物——含铁血黄素的蓄积，均使下眼睑皮肤血红蛋白和黑色素的含量增高，引起下眼睑皮肤颜色加深，造成黑眼圈。

笔者之前的研究中通过共聚焦显微成像检测发现棕黑色黑眼圈患者真皮黑素沉积较正常对照组明显增多［10］。推测在棕黑色黑眼圈轻度组中黑素沉积是其形成的重要因素；在青紫色和棕黑色黑眼圈中度以上组新生血管数量增加可能是黑眼圈形成的重要因素之一，下眼睑微血管数量增加与黑眼圈程度可能存在正相关。因本实验受试者数量较少，所得结果可能出现偏差，有待今后大样本研究结果进一步证实。

［1］ Marks MB. Recognizing the allergic person ［J］. Am Fam Physician，1977， 16（1）：72-79.

［2］ Marks MB. Allergic shiners. Dark circles under the eyes in children ［J］. Clin Pediatr （Phila）， 1966， 5（11）：655-658.

［3］ Oresajo C， Dickens M， Znaiden A. Eye area problems puffiness， bags，dark circles and crowsfeet ［J］. Cosmet Toiletries， 1987， 102：29-34.

［4］ Gupta MA， Gupta AK. Dissatisfaction with skin appearance among patients with eating disorders and non-clinical controls ［J］. Br J Dermatol， 2001， 145（1）：110-113.

［5］ Matsumoto M， Kobayashi N， Osamu H， et al. Study on the mechanisms associated with dark circles ［J］. J Soc Cosmet Chem， 2000，34：152-159 （in Japanese）.

［6］ Masuda Y， Takahashi M， Satou A， et al. Dermatological study on dark eye circles and their treatment with newly developed cosmetics ［J］. J Soc Cosmet Chem， 2004， 38： 202-210 （in Japanese）.

［7］ Rajadhyaksha M， González S， Zavislan JM， et al. In vivo confocal scanning laser microscopy of human skin II： advances in instrumentation and comparison with histology ［J］. J Invest Dermatol， 1999， 113（3）：293-303.

［8］ Brugarolas J， Kaelin WG Jr. Dysregulation of HIF and VEGF is a unifying feature of the familial hamartoma syndromes ［J］. Cancer Cell， 2004， 6（1）：7-10.

［9］ Kim SJ， Rabbani ZN， Dewhirst MW， et al. Expression of HIF-1alpha，CA IX， VEGF， and MMP-9 in surgically resected non-small cell lung cancer ［J］. Lung Cancer， 2005， 49（3）：325-335.

［10］ Xu TH， Yang ZH， Li YH， et al. Treatment of infraorbital dark circles using a low-fluence Q-switched 1，064-nm laser ［J］. Dermatol Surg，2011， 37（6）：797-803.

Assessment of the amount of microvessels in the lower eyelid of infraorbital dark circles using in-vivo laser reflectance confocal microscopy

XU Tian-hua，YANG Zhen-hai，CHEN Guang，et al
Department of Dermatology， the First Afiliated Hospital of China Medical University， Shenyang 110001， China

Objective To assess the amount changes of microvessels in the lower eyelid with dark-brown type of infraorbital dark circles （DC）. Methods The skin biopsies were collected among the 70 patients who received plastic surgery of the lower eyelid， one half of whom had DC. The subjects were divided into two groups： A （＜30 yrs） and B （31～40 yrs）， and each group was divided into four grades： normal，mild， moderate and heavy. The dermal melanin deposition and the amount of microvessels of these subjects were examined using in-vivo laser reflectance confocal microscopy （RCM）. Results Significant increase in the density of microvessels was observed in the moderate and heavy group with mainly red/violet and dark/brown group with DC compared to those without. The differences between mild and moderate group， moderate and heavy group were statistically significant. Conclusion An increase of microvessels amount was observed at the site of lower eyelid with dark circles. The increase of microvessels amount seems to be one of the factors that induce dark circles.

Dark circle，infraorbital；Microvessels；Laser reflectance confocal microscopy，in-vivo

R443.8

A

1674-1293（2016）04-0250-03

2015-11-25

2016-01-19）

（本文编辑 耿建丽）

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20160408

2012年度辽宁省博士科研启动基金（编号：辽科发2012.38号）

110001 沈阳，中国医科大学附属第一医院皮肤科（徐天华，杨振海，陈光，李远宏，高兴华，陈洪铎）

徐天华， 副教授、副主任医师，硕士生导师，研究方向：激光/光免疫皮肤病学、美容皮肤病学、皮肤真菌病学，E-mail： xutian5151@163.com