郭项雨，马 强,孟宪双，李 焘，李文雅，白 桦

(中国检验检疫科学研究院，北京 100176)

近年来，随着化妆品行业的不断发展，防晒化妆品因具有保护人体免受紫外线辐射损伤的功效而广受消费者的青睐，市场对防晒化妆品的需求也与日俱增。紫外线吸收剂是防晒类化妆品配方中的一种功效添加成分，可以起到防晒功效[1 - 3]。帕地马酯是一种典型紫外线吸收剂，可分为帕地马酯A和帕地马酯O。其中，帕地马酯A由于其对眼睛、呼吸道和皮肤有刺激作用，我国《化妆品安全技术规范》(2015年版)中明确规定化妆品中不得添加帕地马酯A[4]；而帕地马酯O作为一种常见的紫外线吸收剂，广泛应用于化妆品及其它透光防日晒工业品中。

目前，针对防晒化妆品中紫外线吸收剂的检测方法主要有薄层色谱法(TLC)[5]、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)[6,7]、高效液相色谱法(HPLC)[8,9]、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)[10,11]、微乳液电动色谱法(MEKC)[12]、实时直接分析质谱法(DART-MS)[13]等。虽然上述检测方法涉及了一些种类的紫外线吸收剂，但防晒化妆品中帕地马酯A和帕地马酯O的测定方法尚未见报道。本文研究并建立了防晒类化妆品中帕地马酯的测定方法，对于确保化妆品质量安全和消费者健康安全具有积极意义。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国，Agilent公司)；ACQUITY超高效液相色谱仪，Xevo TQ MS三重四极杆质谱仪，MassLynx数据处理系统(美国，Waters公司)；Milli-Q超纯水器(美国，Millipore公司)；KQ-600B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；CR 21G型高速冷冻离心机(日本，日立公司)。

帕地马酯A(CAS：14779-78-3，纯度≥97%)购自上海刘氏医药科技有限公司，帕地马酯O(CAS：21245-02-3，纯度≥97%)购自美国Sigma公司。准确称取帕地马酯A和帕地马酯O各10 mg，分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液。根据需要用甲醇稀释成适用浓度的混合标准工作溶液。甲醇、乙腈为色谱纯试剂(美国Fisher公司)；其他试剂均为分析纯。

1.2 样品前处理

准确称取0.2 g样品(膏霜类样品需加入0.4 g NaCl)于30 mL具塞离心管中，加入20 mL甲醇，超声辅助提取20 min，以5 000 r/min离心10 min，上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤后，供高效液相色谱测定。

1.3 高效液相色谱条件

色谱柱：XTerra MS C18柱(250×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-水(90∶10，V/V)，流速：1.0 mL/min；等度洗脱；进样量：10 μL；柱温：30 ℃；检测波长：310 nm。帕地马酯A和帕地马酯O混合标准溶液的高效液相色谱图见图1。

1.4 液相色谱-串联质谱确证条件

色谱条件：XBridge C18柱(150× 2.1 mm,3.5 μm)；流动相：乙腈-0.1%甲酸溶液(90∶10，V/V)，等度洗脱；流速：0.3 mL/min；进样量：5 μL；柱温：30 ℃。质谱条件：电喷雾离子源；正离子模式；毛细管电压：3.5 kV；萃取锥孔电压：3.0 V；离子源温度：150 ℃；脱溶剂气温度：500 ℃；脱溶剂气流量：1 000 L/h；锥孔气流量：50 L/h；多反应监测模式(MRM)检测，质谱分析参数见表1，帕地马酯A和帕地马酯O混合标准溶液的总离子流图见图2。

表1 帕地马酯A和帕地马酯O的质谱分析参数

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

根据帕地马酯A和帕地马酯O的化学结构式，选择在190～400 nm范围内分别对2种帕地马酯标准溶液进行全波长扫描以确定其最大吸收波长。结果表明，帕地马酯A和帕地马酯O均在波长310 nm处有最大吸收，因此将检测波长设定为310 nm。

2.2 色谱柱的优化

实验分别考察了Eclipse XDB C18柱(250×4.6 mm,5 μm)、XTerra MS C18柱(250×4.6 mm,5 μm)、Promosil C18柱(250×4.6 mm,5 μm)、Symmetry C18柱(250×4.6 mm,5 μm)和Kromasil C18柱(250×4.6 mm,5 μm)对帕地马酯A和帕地马酯O的分离效果。结果表明，不同C18色谱柱对帕地马酯A和帕地马酯O的分离及色谱峰形影响不大，但采用XTerra MS C18柱(250×4.6 mm,5 μm)时，帕地马酯A和帕地马酯O的色谱峰形最佳。

2.3 流动相的优化

分别选择甲醇∶水(50∶50、80∶20、90∶10)、乙腈∶水(80∶20、90∶10)作为流动相进行等度洗脱，考察其对帕地马酯A和帕地马酯O色谱行为的影响。结果表明，选择乙腈∶水(90∶10)作为流动相时，帕地马酯A和帕地马酯O的色谱峰形最好，保留时间较为合理，因此流动相最终选择为乙腈∶水(90∶10,V/V)。

2.4 柱温的优化

在温度25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃条件下，考察了色谱柱柱温对分离效果的影响。结果表明，在不同柱温下，帕地马酯峰形无显著差异，保留时间随温度增加逐渐变短。柱温大于30 ℃时，帕地马酯A保留时间过短，基质成分易对其造成干扰；而在柱温30 ℃条件下，帕地马酯保留时间最为合理，因此柱温选择为30 ℃。

2.5 提取溶剂的选择

以不含帕地马酯A和帕地马酯O的化妆品作为空白样品，向其中加入一定量帕地马酯混合标准溶液，充分混匀后，静置过夜。然后按1.3样品前处理步骤分别进行提取。结果表明，以甲醇和乙腈作为提取溶剂，对帕地马酯的提取效率无明显差异。考虑到乙腈的毒性较大及成本较高，最终确定甲醇为样品提取溶剂。

2.6 质谱确证

由于化妆品配方中成分较多，基质复杂，而液相色谱-串联质谱法具有更好的特异性和抗干扰能力，因此进一步开发了帕地马酯A和帕地马酯O的液相色谱-串联质谱确证方法，对疑似阳性样品加以确证。

2.7 方法的线性范围、检出限和定量限

将一系列不同质量浓度的帕地马酯A和帕地马酯O混合标准溶液依次进样，以峰面积对质量浓度进行线性回归，绘制标准工作曲线。结果见表2。

表2 帕地马酯A和帕地马酯O的检出限、定量限、线性范围和相关系数

2.8 方法的回收率与精密度

分别称取经测定不含帕地马酯A和帕地马酯O的防晒化妆品作为空白样品，分别添加低、中、高三个浓度的标准混合溶液，同时帕地马酯O增加一个限量浓度。回收率和精密度结果见表3。空白化妆品样品加标后提取，典型色谱图如图3所示。

表3 帕地马酯A和帕地马酯O的平均回收率及精密度结果(n=6)

2.9 实际样品的测定

按照本研究建立的方法对市售、网购等多种途径获取的24件防晒化妆品样品进行了测定，其中膏霜类样品8件、水剂类样品8件和散粉类样品8件。结果表明，所测化妆品样品中均未检出帕地马酯A和帕地马酯O。

3 结论

本研究建立了同时测定化妆品中帕地马酯A和帕地马酯O的高效液相色谱检测方法及液相色谱-串联质谱确证方法。该方法准确、快速、灵敏度高，适用于化妆品中帕地马酯A和帕地马酯O的测定。