顾宇翔*， 周泽琳， 熊 薇

(上海市质量监督检验技术研究院，上海 200233)

克螨特又名炔螨特，对成螨、若螨、幼螨有效，杀卵效果相对较差，并能有效控制螨类的繁殖，是一种低毒广谱性杀螨剂。乐杀螨对螨类有速效作用，对卵、幼虫、成虫的各个阶段均有效，但吸入、摄入或皮肤吸收均可中毒，对眼睛有轻微刺激性。目前，市场上存在不少宣称具有除螨效果的化妆品，但《化妆品卫生规范》(2007年版)中对这两种禁用广谱杀螨剂没有相应的检测方法，为了加强化妆品禁限用物质的监督管理，有必要建立除螨类化妆品中乐杀螨和克螨特的测定技术。

已见报道的克螨特含量测定方法主要针对植物、鱼类等[1 - 6]，主要有气相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱法和液相色谱-质谱法等方法。在前处理领域，比较多的是有机溶剂提取，然后经过萃取或者过柱进行净化等，整个过程操作较为复杂。乐杀螨的检测方法很少，但有标准(SN 0523-1996)《出口水果中乐杀螨残留量检验方法》可供参考[7]。国外报道的乐杀螨和克螨特测定多为几十种乃至上百种农药的同时检测[8 - 10]，其前处理和测定方法为了兼顾各个农药故针对性不强。鉴于化妆品的基质和植物、鱼类存在较大差异，需要研究适合于化妆品的前处理和测定技术。本文采用固相萃取-高效液相色谱法测定化妆品中乐杀螨和克螨特，可为我国化妆品的市场监督与企业管理提供技术支持。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters2695型液相色谱仪，带二极管阵列检测器；Waters Florosil固相萃取柱。

乐杀螨和克螨特混合标准溶液：称取乐杀螨和克螨特标准品各10 mg(购自美国Sigma公司，精确至0.1 mg)至50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容成混合标准溶液。使用时稀释成所需浓度梯度。乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯。实验所用水为二级去离子水。

1.2 色谱条件

色谱柱：安捷伦SB C18柱(250×4.6 mm，5 μm)；流动相：水∶乙腈=26∶74(V/V)，流量：1 mL·min-1；柱温：30 ℃，进样量：10 μL；检测波长：224 nm。

1.3 实验方法

称取样品1.000 g于25 mL具塞刻度离心管中，加入正己烷，漩涡振荡1 min混匀，定容至10 mL。水浴中超声提取15 min，8 000 r·min-1离心3 min。将Florosil固相萃取柱先用5 mL正己烷活化，然后取离心后的样品上清液2 mL加入小柱(如上清液较为浑浊，可以提高离心速度或用滤膜过滤后再上样)。上样结束后用3 mL正己烷洗涤，然后用3 mL 5%丙酮-正己烷溶液洗脱，收集洗脱液于常温氮吹至干，用1 mL 乙腈溶解并超声助溶，经0.22 μm滤膜过滤后检测。上述过程的流速均控制在1 mL·min-1以下。

2 结果与讨论

2.1 色谱柱和流动相的选择

实验比较了默克RP18柱、资生堂MG C18柱和安捷伦SB C18柱，当流动相中乙腈的体积分数为74%～80%时对基质复杂、干扰多的化妆品样品分离效果的影响。结果表明，使用RP18柱、MG C18柱时，乐杀螨和克螨特易受到杂质组分的干扰。使用SB C18柱，当流动相中乙腈为74%时，分离效果较好。优化的色谱条件见1.2节。

2.2 乐杀螨和克螨特的定性确证

在优化色谱条件下，乐杀螨和克螨特的保留时间分别为9.7 min和15.0 min，用二极管阵列检测器扫描获得其210～400 nm间的特征光谱曲线作为鉴别所分离峰的依据。该曲线可用于干扰峰的鉴别，结合保留时间一起作为定性依据，提高没有质谱情况下的确证能力。

2.3 固相萃取条件的选择

实验比较了Florosil、Silica、NH2、PSA和CN 5种固相萃取(SPE)柱的萃取效果。表1列出了不同固相萃取柱使用10%丙酮-正己烷洗脱液时的回收率，其中NH2、PSA和CN固相萃取柱的回收率偏低。考察 了不同浓度的丙酮-正己烷洗脱液对于Florosil、Silica固相萃取柱洗脱效果的影响，发现Florosil固相萃取柱使用5%丙酮-正己烷时能将样品中的乐杀螨和克螨特洗脱下来，而Silica固相萃取柱需要10%丙酮-正己烷才能洗脱完全，鉴于丙酮的量越多可能使更多的杂质被洗脱下来，因此实验选用Florosil固相萃取柱和5%丙酮-正己烷作为洗脱液。

2.4 标准曲线

绘制了标准曲线，结果表明乐杀螨质量浓度(X)在1.02～102 μg·mL-1范围内与色谱峰面积(Y)呈线性关系，线性回归方程为：Y=37 760X(μg·mL-1)+7 625，相关系数R2=0.999。克螨特质量浓度在2.80～112 μg·mL-1范围内与色谱峰面积呈线性关系，线性回归方程为：Y=17 350X(μg·mL-1)+2732，相关系数R2=0.999。

2.5 方法检出限和精密度

在所建立的条件下，分别以3、10倍空白样品的标准偏差结合空白基质样品加标的情况确定乐杀螨和克螨特的检出限分别为3.5 mg·kg-1和8.0 mg·kg-1；定量限分别为10 mg·kg-1和25 mg·kg-1。

将某一乐杀螨和克螨特低含量样品提取液连续进样测定10次，计算得相对标准偏差(RSD)分别为4.0%和3.1%。将某一乐杀螨和克螨特高含量样品提取液连续进样测定10次，计算得相对标准偏差(RSD)分别为2.23%和3.02%。

2.6 回收率

取不同量的乐杀螨和克螨特标准溶液，分别加入各类样品中，得高、中、低样品加标回收率，如表2所示。乐杀螨回收率为82.6%～107.0%，克螨特回收率为80.4%～105.9%。

表2 加标回收率(n=10)

2.7 样品分析

用本方法对市售几十种宣称具有除螨作用的化妆品进行测定，未检出含有乐杀螨和克螨特的产品。

3 结论

本研究建立了正己烷超声提取-固相萃取-HPLC测定化妆品中乐杀螨和克螨特的方法，填补了国内检测技术的空白。该方法乐杀螨检出限和定量限分别为3.5 mg·kg-1和10 mg·kg-1;克螨特检出限和定量限分别为8.0 mg·kg-1和25 mg·kg-1，加标回收率分别为82.6%～107.0%(乐杀螨)和80.4%～105.9%(克螨特)，适用于监管部门对产品中违规使用乐杀螨和克螨特的鉴别。