周显飞， 田　舍， 王　杰， 贾亮亮， 喻　超， 江建新

(贵州医科大学附院 肝胆外科， 贵州 贵阳　550004)



·专题研究1·

microRNA-29c对人胰腺癌细胞侵袭转移的抑制作用及机制*

周显飞， 田舍， 王杰， 贾亮亮， 喻超， 江建新**

(贵州医科大学附院 肝胆外科， 贵州 贵阳550004)

目的： 探讨microRNA-29c对人胰腺癌细胞(AsPC-1、BxPC-3、PANC-1、MIA PaCa-2)生物学特性的影响。方法： 培养1种人正常胰腺上皮细胞(HPDE)及4种人胰腺癌细胞(AsPC-1、BxPC-3、PANC-1、MIA PaCa-2)，采用real-time PCR 法观察5种细胞系中microRNA-29c 的表达差异，以microRNA-29c过表达腺病毒感染的PANC-1 和MIA PaCa2细胞作为实验组，以空载体感染的PANC-1 和MIA PaCa2细胞作为阴性对照组，采用细胞划痕实验、Transwell法检测两组细胞体外侵袭能力，Western blot检测两组细胞上皮间充质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(Vimentin)及E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达。结果： real-time -PCR 显示各胰腺癌细胞系中microRNA-29c 水平明显低于正常胰腺细胞系(P<0.05)，细胞划痕实验发现感染腺病毒48 h后实验组PANC-1、MIA PaCa-2细胞的迁移距离明显短于阴性对照组(P<0.05)，Transwell 小室细胞侵袭实验发现实验组PANC-1 和MIA PaCa-2 细胞侵袭数量明显低于阴性对照组(P<0.05)；Western blot蛋白免疫印迹结果显示PANC-1 和MIA PaCa-2细胞过表达microRNA-29c后， Vimentin表达减少，E-cadherin表达增加。结论： microRNA-29c的过表达可有效抑制胰腺癌细胞的体外侵袭与转移，可能与Vimentin表达减少，E-cadherin表达增加有关，有望成为胰腺癌生物治疗的潜在靶点。

微小RNA； microRNA-29c； 胰腺癌； 腺病毒； 细胞侵袭； 转移； 细胞划痕实验

胰腺癌是恶性程度最高、预后最差的实体瘤之一，具有极为恶性的生物学特征，绝大部分患者(>85%)在确诊时已伴有局部和远处转移，从而导致患者的5年生存率极低(<5%)[1]。因此，更多地了解胰腺癌的发病机制对于胰腺癌的早期发现、诊断及治疗至关重要。microRNA是一类真核生物内源性小分子单链RNA, 长度通常为21～ 22个核苷酸, 能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合，从而对基因进行转录后表达的调控[2]。microRNA广泛参与机体发育、细胞增殖、细胞凋亡等一系列生物学过程，与肿瘤的发生、发展密切相关[3-5]，某些microRNA 通过抑制靶基因的表达，在肿瘤发生、发展及侵袭转移中发挥着关键作用[6-10]。microRNA-29c是microRNA-29家族中的一员[11]，其在众多实体肿瘤如鼻咽癌、神经胶质瘤、胃癌、肝细胞癌、膀胱癌及结肠癌中均呈低表达，作为抑癌基因存在，最近的研究发现，microRNA-29c在裸鼠模型中抑制胰腺癌肝转移并影响生存率[12]。本研究通过体外细胞实验分析microRNA-29c对胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响，从而揭示microRNA-29c在胰腺癌细胞侵袭转移中的作用。

1　材料与方法

1.1细胞株及主要试剂

人正常胰腺上皮细胞HPDE，人胰腺癌细胞AsPC-1、BxPC-3、PANC-1及MIA PaCa-2获赠于华中科技大学附属同济医院胆胰外科实验室。胎牛血清购自gibico，RNA 抽提试剂TRIzol 购自Invitrogen 公司，逆转录试剂盒、SYBR Premix ExTaq 试剂盒均购自TaKaRa 公司。microRNA-29c 腺病毒过表达载体的构建、腺病毒包装与滴度检测由山东维真生物科技有限公司完成。microRNA-29c的逆转录引物及real-time PCR 引物套装购自广州锐博公司，E-cadherin、Vimentin、GAPDH一抗购自武汉三鹰有限公司，鼠抗和兔抗二抗购自博士德公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养胰腺正常上皮细胞HPDE，人胰腺癌细胞AsPC-1及BxPC-3用含10% 胎牛血清的RPMI1640 培养基培养；人……