张楠　偰光华

[摘要]目的分析缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在胆管癌细胞中的表达情况及其对糖酵解的影响。方法分别以不同浓度的氯化钴溶液诱导的缺氧条件下培养胆管癌QBC939细胞，测定并比较培养24h后各组细胞HIF-1α、PK-M2蛋白表达水平和乳酸分泌量。结果缺氧组的HIF-1α、PK-M2蛋白表达水平均显著高于常氧组，胆管癌QBC939细胞24h乳酸分泌量，随氯化钴浓度逐渐增加，且均显著高于常氧培养时分泌的乳酸量，比较差异具有统计学意义（P<0.05）。经Pearson相关分析法分析，PK-M2与HIF-1α呈显著正相关（r=0.436，P=0.002）。结论缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在人胆管癌QBC939细胞中的蛋白表达水平显著提高，且均在胆管癌细胞糖酵解水平的升高过程中发挥重要作用。

[关键词]缺氧诱导因子-1α；M2型丙酮酸激酶；胆管癌；糖酵解

[中图分类号]R735.8 [文献标识码]A [文章编号]2095-0616（2016）05-34-03

胆管癌是十分常见的一种消化系统恶性肿瘤，发源于胆管上皮细胞，在所有消化系统恶性肿瘤的患者中占到3%，以低分化胆管癌为主，有男性发病率高于女性，60～65岁人群中高发的特点[2-41。本文就氯化钴诱导的缺氧条件下，人胆管癌QBc939细胞中HIF-1α、PK-M2的蛋白表达变化情况进行分析，并探讨其对糖酵解的影响情况。现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选择人类胆管癌细胞株OBC939（购自上海和元生物技术有限公司）作为实验细胞株，以氯化钴为缺氧模拟剂诱导缺氧条件。

1.2方法

将购买的在液氮中冻存的细胞进行复苏和传代处理，其中，细胞的复苏主要包括恒温水浴融化、DMSO稀释、离心分离、DMEM培养基（含1%青链霉素以及10%FBS的混合液）加入、细胞培养箱培养等步骤；细胞传代则是在培养皿中的细胞覆盖率达到80%～90%时，用含EDTA的胰蛋白酶消化、细胞悬浮、离心分离后转移并在含完全培养基的培养皿中继续培养，按1：3～1：5的比例传代。……