杨让贤　颜伯钧　解大佑　付现春　杨　阳　周　青

云南中医学院(昆明650500)



仙苓宁嗽汤对咳嗽的作用机理*

杨让贤颜伯钧解大佑付现春杨阳周青△

云南中医学院(昆明650500)

目的：通过动物实验观察仙苓宁嗽汤的安全性、镇咳、祛痰、抗炎症作用，以及加减仙鹤草对临床咳嗽治疗的影响。方法：分别采用急性毒性实验，以小鼠存活状况作为评价标准。小鼠浓氨水引咳法，以咳嗽潜伏期(从给氨水后至发生咳嗽的时间)、2min内咳嗽次数作为评价指标；小鼠耳廓肿胀法，用二甲苯制作抗炎模型，以耳廓肿胀程度作为评价指标；小鼠酚红祛痰实验，以小鼠气管分泌物吸光值作为观测标准。结果：仙苓宁嗽汤浸膏对小鼠的急性毒性较低，仙苓宁嗽汤高、低剂量能延长小鼠咳嗽潜伏期，减少2min内咳嗽次数；仙苓宁嗽汤去仙鹤草高、低剂量及高剂量仙鹤草能延长小鼠咳嗽潜伏期，减少2min内咳嗽次数。结论：仙苓宁嗽汤高、低剂量及仙鹤草高剂量具有止咳作用，可能不具抗炎作用。

主题词咳嗽实验，动物@仙苓宁嗽汤

仙苓宁嗽汤是云南省内科病专家周青教授经过多年的临床经验总结出来的经验方，由《医宗金鉴》所载之温胆汤化裁而成，功效为清热化痰，下气止咳[1-2]。全方由柴胡、黄芩、法夏、陈皮、枳实、茯苓、蝉蜕、仙鹤草、僵蚕、生姜、川贝、甘草等中药组成。经过教授门诊广泛运用和初步临床观察，本方具有较为显著的疗效。临床中又发现该方的仙鹤草具有一定止咳效果。为进一步客观评价临床疗效和使用安全性，进行此次探索研究,为仙苓宁嗽汤及仙鹤草单方下一步的开发利用，提供实验依据。

1材料1.1动物健康昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半。昆明医科大学动物实验中心提供[合格证号：SCXK(川)2008-24，生产批号：Dossy-2014-08]。

1.2药品及试剂仙苓宁嗽汤(柴胡、黄芩、法半夏、陈皮、枳实、茯苓、蝉蜕、仙鹤草、僵蚕、生姜、川贝、甘草组成)，由云南省中医医院配制而成。碳酸氢钠(批号：100424)；酚红(批号：100228)；氨水(批号：050109)；二甲苯(批号：2009-2-3)；磷酸可待因片(国药准字H1120673)。

1.3仪器AB204-S电子分析天平；YLS-8A多功能诱咳引喘仪；LG10-2.4A高速离心机；M200PRO酶标仪。

2结果 2.1急性毒性试验小鼠40只，雌雄各半，给药前禁食不禁水12h，以0.4ml/10g给药，给药后给予食物及水，并观察小鼠状况。给药组耐受量为251.2g生药/kg ，存活动物一般状况良好，饮食正常，外观、皮毛、行为、呼吸均正常，鼻、眼、口腔无异常分泌，未见明显异常反应。试验结束后处死小鼠解剖，肉眼观察，主要脏器未见异常。可以推论仙苓宁嗽汤浸膏对小鼠的急性毒性较低,结果见表1。

表1　仙苓宁嗽汤浸膏急性毒性试验动物死亡情况 (n=10)

2.2镇咳实验分别观察仙苓宁嗽汤原方、仙苓宁嗽汤去仙鹤草、仙鹤草单味药对小鼠氨水诱咳治疗效果。取筛选过小鼠160只，雌雄各半，给药前禁食不禁水12h，随机分为仙苓宁嗽汤原方、仙苓宁嗽汤去仙鹤草、仙鹤草单味药组、空白组、阳性对照药组(可待因按0.2ml/10g灌胃给予0.3%)，每组20只。按剂量灌胃给药，连续给药3d，末次给药后30min时将小鼠置于诱咳引喘仪内，以小鼠腹部收缩，同时张大嘴呼吸或发出咳嗽声为指标。观察并记录各组小鼠引咳潜伏期(从给氨水后至发生咳嗽的时间)，以及小鼠2min内咳嗽次数，统计分析结果。仙苓宁嗽汤高、低剂量组有显著延长浓氨水引起的咳嗽潜伏期，降低2min内小鼠咳嗽次数，与空白对照组比较有非常显著差异(P<0.05)。仙苓宁嗽汤去仙鹤草高剂量组与仙鹤草高剂量组(生药浓度与原方相同)有显著延长浓氨水引起的咳嗽潜伏期，降低2min内小鼠咳嗽次数，虽效果不如完整的仙苓宁嗽汤，但与空白对照组比较有非常显著差异(P<0.05)。镇咳实验提示仙苓宁嗽汤高、低剂量、仙苓宁嗽汤去仙鹤草高剂量、仙鹤草高、低剂量均有明显止咳效果(P<0.01)。

2.3抗急性炎症实验将小鼠随机分为5组，分别为：模型组、阳性药组(地塞米松10ml)、仙芩宁嗽汤高剂量组(5.715 g )、中剂量组(1.905 g )、低剂量组(0.635 g )，20只/组。除阳性药腹腔注射给药外，其余各组均灌胃给予对应受试物，模型组给予等体积吐温-80的蒸馏水，1次/d，连续5d。末次给药30 min后，将二甲苯50μl用微量移液器均匀涂布在小鼠右耳内外两侧，致炎30min后处死小鼠，沿耳廓基线剪掉小鼠双耳，分别在双耳的同一部位用直径为9mm的耳肿打孔器打下圆片。计算左右耳片重量差值，计算肿胀度及肿胀抑制率。结果显示：阳性药组耳廓肿胀度13.50±7.4 mg，肿胀抑制率为18.18%，与空白组比较差异显著(P<0.01)。

表2　仙苓宁嗽汤浸膏镇咳实验情况 (n=20)

2.4祛痰实验小鼠80只，雌雄各半，随机分为空白对照组(腹腔注射蒸馏水)；阳性对照组(腹腔注射盐酸氨溴索)；仙苓宁嗽汤高剂量组(157g/kg)、仙苓宁嗽汤低剂量组(39.25g/kg)，各组动物每天给予相应药物，连续给药3d。末次给药后30min, 各组小鼠腹腔注射7.05mmol/l酚红溶液0.5ml，注射后30min脱颈椎处死，仰位固定于手术板上，剪开颈正中皮肤，于喉头下将头磨平的9号针头插入气管内约0.3cm，用丝线结扎固定后用1ml注射器吸取5% NaHCO3溶液0.5ml，注入气管灌洗后抽出，重复灌洗3次，合并灌洗液，作为待测样品液。以没有注射酚红，但操作步骤同上的正常小鼠气管用NaHCO3溶液灌洗液作空白管来测定各组小鼠气管灌洗液吸光度[3-5]。仅阳性药组具有统计学意义，仙苓宁嗽汤高剂量组在数据上有些微上升趋势，但经过统计，仙苓宁嗽汤高、剂量组未出现显著的祛痰效果。

表3　仙苓宁嗽汤对小鼠酚红排泌量的影响(n=20)

3讨论急毒实验通过一次灌胃给予小鼠最大剂量、最大给药体积，观察仙苓宁嗽汤的急性毒性，记录小鼠体重变化、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应(中毒反应的症状、严重程度、起始时间、持续时间、是否可逆)。对濒死及死亡动物应及时进行大体的解剖，小鼠在观察期结束后进行大体解剖，肉眼观察，各主要脏器未见异常。且在最大剂量、最大灌胃体积下小鼠的耐受量是成人的193倍，故而仙苓宁嗽汤在正常服用剂量下毒性较小，较为安全。

小鼠浓氨水引咳实验采用氨水诱咳，制造小鼠咳嗽模型；实验设计分为阳性组、仙苓宁嗽汤组、仙苓宁嗽汤去仙鹤草组、仙鹤草单味药组等八个组，阳性药为磷酸可待因，属于中枢性止咳药，经口给药后，实验数据统计显示：除阳性药(磷酸可待因)外，仙苓宁嗽汤组的镇咳效果最好，止咳效果依次为：仙苓宁嗽汤高剂量组>仙苓宁嗽汤低剂量组>仙鹤草高剂量组>仙苓宁嗽汤去仙鹤草低剂量组>仙苓宁嗽汤去仙鹤草高剂量组>仙鹤草低剂量组。实验中，仙苓宁嗽汤高、低剂量组都能显著延长咳嗽潜伏期，降低小鼠咳嗽次数，说明仙苓宁嗽汤具有较好的止咳作用，实验中还发现一个有趣现象，给予仙苓宁嗽汤的小鼠都发现食欲增加，体重也明显增加，是否因“脾为后天之本、主运化”，“五脏六腑之咳，皆聚于胃，关于肺”，具体原因，还有待继续发掘。仙鹤草在实验中的作用并没有预期的突出和显著，因此除仙鹤草外或许还有其他成分的协同作用，有待进一步探索研究。仙苓宁嗽汤去仙鹤草高、低剂量组与仙鹤草高剂量组都能延长咳嗽潜伏期、降低小鼠咳嗽次数，但止咳效果不如完整的仙苓宁嗽汤。

通过两种剂量显示的实验结果，高、低剂量的仙苓宁嗽汤都没有发现明显的抗炎和祛痰作用，仅小鼠排痰实验数据显示：仙苓宁嗽汤高剂量组有一些上升趋势，说明祛痰作用并非完全无效。现在有关仙苓宁嗽汤及仙鹤草的镇咳作用机制尚不清楚，相关文献也没有类似记载，因此今后有待于更深入的探讨和研究。

[1]梁雪，潘若凡，丁莹，等.麻杏枇杷颗粒对咳喘模型小鼠的影响[J]中医药信息,2013：30(3)：38-40.

[2]李元静，尹春晖，张月玲，等.清金止嗽化痰丸镇咳、祛痰及平喘作用研究[J]中药药理与临床,2010：26(5)：64-66.

[3]杨利娟，王张，孟宪丽，等.基于浓氨水引咳法建立小鼠引咳敏感性剔除标准的方法学研究[J]中药药理与临床,2010：26(5)：64-66.

[4]赵丽芸,单丽囡,何建茹.射干麻黄汤对哮喘祛痰作用的动物实验研究[J].中国中医急诊，2011，20(8):1269；1298.

[5]张金艳，何萍，李贻奎.苦杏仁、桔梗及二者配伍止咳、祛痰作用的研究[J].中国实验方剂学杂质，2010，16(18)：173-175.

(收稿2015-11-28；修回2016-02-20)

*云南省应用基础研究计划项目(201301YH00003)

R441.5

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.070