王云庭，杜杰，金锋，周旭，任玉珍，陈彦琳

(中国中药公司，北京 102600)

不同产地六神曲麦芽低聚糖酶活力实验比较研究△

王云庭，杜杰，金锋，周旭，任玉珍，陈彦琳*

(中国中药公司，北京102600)

目的：比较分析不同产地六神曲质量。方法：采用麦芽低聚糖酶活力为质量评价指标，比较不同产地六神曲生品、炒制品麦芽低聚糖酶活力，同时进行聚类分析。结果：六神曲各产地麦芽低聚糖酶活力有较大差异，其中生品六神曲中活力最高为广西(509.25±7.30)U·g-1、最低为四川2(37.99±0.59)U·g-1，相同产地生品与炒制品比较中河北1生品(406.97±2.20)U·g-1，炒制后活力明显下降(P<0.01)，为(97.19±3.99)U·g-1。结论：不同产地六神曲麦芽低聚糖酶活力均有差异，同一产地六神曲生品麦芽低聚糖酶活力大于炒制品，麦芽低聚糖酶活力可作为六神曲质量评价的指标，根据聚类分析可对不同产地六神曲质量进行分级分类。

六神曲；麦芽低聚糖酶活力；不同产地；聚类分析；质量标准

六神曲为辣蓼、青蒿、杏仁、赤小豆、苍耳加入面粉、麦麸混合后，经发酵而成的曲剂。六神曲饮片的炮制规格有六神曲、炒六神曲、麸炒六神曲、焦六神曲和炒炭六神曲5种，其中六神曲生用具有健脾开胃，并有发散作用，常用于感冒食滞；炒焦后消食化积力强，以治食积泄泻为主；麸炒后具有甘香气，以醒脾和胃为主，用于食积不化，脘腹胀满，不思饮食，肠鸣泄泻等[1]。现代研究认为六神曲主要成分含有酵母菌、挥发油、维生素B族、麦角固醇、苷类、淀粉酶和蛋白酶[2]，但产生药效的物质基础还未明确。目前评价六神曲质量除外观性状外，面对不同产地不同工艺的质量差异较大的六神曲，选取何种成分作为检测指标来评价六神曲质量优劣还需进一步研究明确[3]。以往的六神曲研究主要测定的是α-淀粉酶，其主要作用是仅水解淀粉分子链中的α-1，4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精、寡糖和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉黏度迅速下降，达到“液化”目的[4]。要使淀粉全部降解为微生物可以应用的单糖，还需γ-淀粉酶、麦芽低聚糖酶等多种酶类才能完成[5]。麦芽低聚糖酶为淀粉酶的一种[6]，其酶解产生的麦芽低聚糖具有抑制肠道有害菌生长的作用，本文通过检测不同产地六神曲麦芽低聚糖酶的活力，分析麦芽低聚糖酶活力是否可作为六神曲质量评价指标，为六神曲质量评价研究提供参考。

1 实验材料

1.1试验材料

原药材：分别购买(市售为辣蓼、青蒿、杏仁等药加入面粉或麸皮混和后，经发酵而成的曲剂)不同产地生产厂家的六神曲生品、炒制品共15份，样品来源及相关信息见表1。

表1 六神曲样品信息

试剂：葡萄糖、氢氧化钠(批号：150528)、苯酚(批号：150327)、无水亚硫酸(批号：150410)、四水合酒石酸甲钠(批号：150409)、3，5-二硝基水杨酸(批号：141201)购自国药集团化学试剂有限公司。可溶性淀粉(天津光复精细化工研究所，批号：120807)。混合磷酸盐(北京试剂，批号：20150210)。

1.2试验仪器

紫外-可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)；3-16L台式高速离心机(SIGMA公司，德国)；电子分析天平(梅特勒-托利多XS205，美国)；数显恒温水浴锅HH-4(国华电器有限公司)

2 麦芽低聚糖酶活力测定方法[7]

2.1粗酶液制备

六神曲粉碎，过筛，取40目粉末10g，置三角瓶中，加100mL蒸馏水，置40℃恒温水浴中保温浸提2h，4000r/min离心20min，取上清液，即为酶液，置于具塞锥形瓶中保存，用于麦芽低聚糖酶活性的测定。

2.2标准曲线的制备

取6支25mL具塞刻度试管，编号，各加入2mg·L-1葡萄糖溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，再用蒸馏水定容至2mL，摇匀后各试管再加入DNS试剂1.5mL，置沸水浴中煮沸5min。取出后流水冷却至室温。以0号为空白对照，在波长540nm处比色测定，以标准葡萄糖溶液质量浓度做横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，结果，在0.1-0.5mg/mL范围内，吸光度(Y)与葡萄糖溶液质量浓度(X)的线性关系良好，回归方程为Y=2.0075X-0.0187(R2=0.9994)。

2.3酶活力测定

按照文献方法，取2%的可溶性淀粉水溶液5mL，先加入PH6.4的磷酸缓冲液1mL混匀，在40℃水浴中预热5min，再加入麦芽低聚糖酶提取液0.5mL，摇匀，在此温度下反应30min，后加入2%的氢氧化钠溶液0.5mL终止反应。空白管加入2%的氢氧化钠溶液0.5mL后，补加0.5mL酶液。吸取上述反应液、空白液各0.2mL分别置于比色管中，各加入1.8mL蒸馏水、1.5mLDNS试剂，沸水浴显色5min，加蒸馏水稀释至7mL摇匀。按照与制备标准曲线相同的方法在540nm下比色测定吸光度A。

麦芽低聚糖酶活性为在上述条件下，作用于可溶性淀粉每小时产生1mg麦芽三糖的酶量定义为一个酶活力单位(麦芽低聚糖以麦芽三糖为主)。

麦芽低聚糖酶活性(u/g)=110×OD×V×n/K×W×(1-X)]OD—吸光度，V—浸提酶液体积(mL)，n—酶液稀释倍数，W—六神曲重量(g)，X—六神曲水分含量(%)，K—葡萄糖标准曲线斜率，110—常数。

3 不同产地六神曲质量特征比较结果

3.1不同产地六神曲生品、炒制品麦芽低聚糖酶活力的测定比较

将该15份样品进行酶液提取并测定酶活力，结果见表2、3。

表2 各地六神曲生品麦芽低聚糖酶活力

表3 各地六神曲炒制品麦芽低聚糖酶活力

从表2可看出，各地六神曲生品酶活力大小由高至低，为广西、河北1、四川3、北京2、河北2、北京1、四川1、河北3、陕西、四川2；从表3可看出，各地六神曲炒制品酶活力大小由高至低，为四川3、北京1、北京2、四川1、河北1。

3.2不同产地六神曲生品、炒制品麦芽低聚糖酶活力聚类分析

将各地六神曲淀粉酶活力数据导入SPSS软件进行系统聚类分析，结果见图1、2。

图1 不同产地六神曲生品麦芽低聚糖酶活力聚类分析

图2 不同产地六神曲炒制品麦芽低聚糖酶活力聚类分析

根据六神曲生品酶活力聚类分析后按酶活力由大到小可分为5类：一类为广西；二类为四川3、河北1、北京2；三类为河北2；四类为四川1、河北3、陕西、北京1；五类为四川2。根据六神曲炒制品酶活力聚类分析后按酶活力由大到小可分为2类：一类为北京1、北京2、四川3；二类为四川1、河北1。

4 讨论

六神曲生品和炒制品药效作用不同，生用具有健脾开胃，炒焦后消食化积力强，本实验中选取上述四川1、四川3、北京1、北京2、河北1产地的生品、炒制品进行组内比较，除北京1外，各个产地的生品麦芽低聚糖酶活力都较炒制品高，说明相同产地生品麦芽低聚糖酶活力显著大于炒制品，可将麦芽低聚糖酶活力为指标，作为分析六神曲生品、炒制品工艺研究的评价方法，通过这一指标也可为研究不同产地六神曲的药效作用提供依据，但其内在物质基础及药效的变化，有待进一步研究[8]。

目前六神曲处方来源为卫生部药品标准(中药成方制剂)第19册、地方中药材标准、炮制规范等，六神曲生产工艺标准较多，不同产地所用标准不同，生产过程中受不同产地气候、环境等多种因素影响，导致其外观性状有较大差异，通过本实验样品可看出不同产地生产的六神曲性状特征各有不同，形状多为方形块状，少数颗粒状或粉状；生品颜色多为土黄色、黄白色，炒制品多为黄褐色或黄色；质地和断面特征也都存在差异。所以以传统气味、外观等感观判断六神曲质量有很强的主观性，难以量化评价六神曲质量优劣[9]。医学上采用淀粉酶等制剂在临床上治疗消化系统疾病，六神曲中酶含量高低可作为判断质量好坏的指标，本文以麦芽低聚糖酶的活力为六神曲质量评价指标，对不同产地六神曲比较分析，麦芽低聚糖酶的活力检测可作为六神曲质量评价的一种方法和指标。此外通过聚类分析对不同产地六神曲质量进行分类，该统计方法也可作为评价质量等级的一种依据。

[1] 雷载权.中药学[M].上海：上海科学技术出版社，1995.172.

[2] 练晶军.六神曲质量特征及发酵变化研究[D].北京：北京中医药大学，2011.

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[6] 李勇.碳水化合物加工技术[M].北京：化学工业出版社，2004：31-35.

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[9] 付新.中药六神曲的研究进展[J].决策与信息，2015，(9)：162.

AComparativeStudyofLiushenquMaltooligosaccharidesActivityTest

WANGYunting,DUJie，JINFeng，ZHOUXu，RENYuzhen，CHENYanlin*

(ChinaNationalTraditionalChineseMedicineCorp.，Beijing100195，China)

Objective：To compare and analyze the Liushenqu quality of different origin.Methods：Using malt oligosaccharide enzyme activity for the quality evaluation，different origin Liushenqu raw products，fried products maltooligosaccharides enzyme activity compared，and the data were applied by cluster analysis.Results：The maltooligosaccharides enzyme activities of Liushenqu origins were quite different，in which raw products in Guangxi vitality Liushenqu was the highest (509.25±7.30) U·g-1the lowest in Sichuan2(37.99±0.59) U·g-1.From the same origin，the enzyme activity of raw product of Hebei1(406.97±2.20) U·g-1was significantly higher than that of fried product (97.19±3.99U) ·g-1.Conclusion：Liushenqu maltooligosaccharide enzyme activity of different origins were different，the same origin raw products Liushenqu maltooligosaccharide enzyme activity greater than fried products.maltooligosaccharide enzyme activity could be used to evaluate the quality of Liushenqu.

shenqu;maltooligosaccharides enzyme activity;different origin;cluster analysis;quality standard

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.7.003

2016-03-29)

国家中医药管理局中医药行业科研专项中药类项目“六神曲等7种中药发酵技术及规范化应用研究”(项目编号201507004-03)

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陈彦琳，副主任中药师，研究方向：中药炮制工艺与中药饮片质量控制，Tel：(010)61252955，E-mail：154439647@qq.com