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HPLC法测定丹酚酸B中己内酰胺残留

2016-09-20陈鸿楠郭秀娟华国栋北京中医药大学东方医院药学部北京100078

北方药学 2016年2期
关键词:酚酸原料药甲醇

陈鸿楠 邓 颖 郭秀娟 华国栋(北京中医药大学东方医院药学部 北京 100078)

HPLC法测定丹酚酸B中己内酰胺残留

陈鸿楠邓颖郭秀娟华国栋*(北京中医药大学东方医院药学部北京100078)

目的:建立丹酚酸B原料药中己内酰胺残留的测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定。实验仪器为:安捷伦1200型高效液相色谱仪,Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)。色谱条件:乙腈∶水=11∶89(v/v),等度洗脱;检测波长210nm;流速1.0mL·min-1;柱温25℃;进样体积10μL。结果:己内酰胺同其他物质可以达到基线分离。测得己内酰胺在0.00123~0.0502g·L-1线性关系良好。己内酰胺平均回收率为100.28%,RSD为1.63%(n=9)。结论:该法操作简便,重现性好,结果准确可靠,可以用于丹酚酸B原料药中残留己内酰胺的测定。为丹酚酸B质量控制提供了可靠的数据。

丹酚酸B原料药 己内酰胺残留 高效液相色谱法

丹酚酸B是唇形科植物丹参中的主要成分,具有对心肌缺血-再灌注损伤的保护、对心脏微血管内皮细胞的延迟保护、对动脉粥样硬化及血栓防治功效、对脑缺血损伤的保护和抗衰老、抗肿瘤等多种药理活性[1~2]。在制备丹酚酸B过程中主要使用了柱层析的方法,使用了聚酰胺填料进行纯化。聚酰胺在聚合时仍有大量单体未参与反应,因此在柱层析过程中会有大量己内酰胺单体被洗脱进而进入产品,原料药中可能有己内酰胺残留。己内酰胺对人身体有不良作用[3],因此在使用时需要控制己内酰胺残留量。本文参考有关文献[4]建立了高效液相色谱法对3批丹酚酸B存在的己内酰胺残留进行测定,现报道如下。

1 仪器与试药

1200型高效液相色谱仪,配有DAD检测器、四元泵、自动进样器,美国安捷伦公司;Zorbax SB-C18色谱柱(250mm× 4.6mm,5μm),美国安捷伦公司;Metter Toledo xS5分析天平。丹酚酸B(原料药,纯度大于98%,批号20130819、20131025、20131216,由北京康悦药业有限公司提供);乙腈、甲醇均为色谱纯,纯化水使用Milli-Q(美国Millipore公司)制备;己内酰胺为分析纯,纯度为99%,购自国药集团化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1色谱条件:乙腈∶水=11∶89(v/v),等度洗脱;检测波长210nm;流速1.0mL·min-1;柱温25℃;进样体积10μL。

2.2对照溶液的配制

对照品储备液的配制:精密称定5.02mg己内酰胺,用甲醇溶解并定容至10mL,得己内酰胺对照品储备液。

对照品工作液的配制:精密移取1mL储备液定容至10mL即得含有己内酰胺50.2μg·mL-1的对照品工作溶液。

2.3供试品溶液的配制:精密称定50.08mg丹酚酸B,用甲醇溶解并定容至10mL即得含有丹酚酸B 5.01g·L-1的溶液。

2.4系统适用性试验:将“2.2”中对照品工作溶液和“2.3”中供试品溶液按“2.1”中色谱条件进行测定,记录色谱图,己内酰胺的分离度大于1.5,理论塔板数均大于2000。对照品和供试品色谱图见图1。

2.5线性:分别取“2.2”中储备溶液1、0.5、0.25、0.1、0.05、0.025mL,分别用甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中,按“2.1”中色谱条件进行测定。以己内酰胺的峰面积为纵坐标(Y),浓度为横坐标(x),进行线性回归。得到己内酰胺在1.23~50.2μg·mL-1的线性方程为:Y=10.3630x-0.1967(R2=0.9999)。

结果表明,在1.23~50.2μg·mL-1己内酰胺峰面积与浓度均呈良好的线性关系。

2.6回收率:精密称取批号为20130819的供试品50mg置于10mL容量瓶中,再从“2.2”中对照品储备液中分别精密量取0.8、1.0、1.2mL至容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,得低中高三个浓度的加样回收测定溶液,按“2.1”中色谱条件每个浓度平行测定3次,测得己内酰胺回收率为100.28%,RSD为1.63% (n=9)。

2.7精密度:取“2.2”中对照品工作溶液,按“2.1”中色谱条件重复进样测定6次,记录色谱图,得到己内酰胺峰面积RSD为0.29%。

2.8重复性:精密称取批号为20130819的供试品50mg,按“2.3”中方法进行处理,共处理6份。分别按“2.1”中色谱条件进行测定,记录色谱图,使用“2.2”中工作溶液作为外标定量。测得己内酰胺的平均含量为0.11%,RSD为2.70%(n=6)。

2.9检测限和定量限:精密吸取“2.5”中含有己内酰胺1.23μg· mL-1的溶液用甲醇逐级稀释制成测定溶液。分别取各个溶液1mL,按“2.1”中条件检测。

当信噪比为10∶1时样品浓度为定量限,此时己内酰胺浓度为0.41μg·mL-1。当信噪比为3∶1时样品浓度为检测限,此时己内酰胺浓度为0.14μg·mL-1。

2.10样品测定:取3批样品各50mg,精密称定,按“2.3”中供试品溶液制备项下方法进行处理,在“2.1”中色谱条件下进行测定,按照外标法计算各溶剂的含量,得批号为20130819、20131025、20131216 3批样品中己内酰胺的含量分别为0.11%、0.08%、0.12%(n=3)。

3 讨 论

3.1液相色谱条件的选择和优化:经过筛选发现,丹酚酸B和己内酰胺在甲醇中均具有良好的溶解性,且丹酚酸B在甲醇中溶解速度较快,因此选择甲醇作为溶剂。

前期分别考察了检测波长分别为203nm、210nm、254nm下测定结果。发现在波长为210nm下己内酰胺具有最大吸收波长,信噪比最高,检测效果最好。而在203nm下己内酰胺信噪比较低,在254nm己内酰胺吸收太弱,均不利于测定。因此选择254nm作为检测波长。

本品仅需要检测己内酰胺残留,己内酰胺同丹酚酸B极性差异较大,故选用等度洗脱法。经过条件和文献查阅摸索,确定洗脱条件为乙腈∶水=11∶89(v/v)。

[1]杜冠华,张均田.丹参现代研究概况与进展(续一)[J].医药导报,2004,23(6):0355-0361.

[2]李认书,李永强.丹酚酸的研究进展[J].时珍国医国药,2003,14 (6):371-373.

[3]刘君动,叶正良,李德坤,等.丹参多酚酸中己内酰胺和低聚物的残留测定[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(5):62-65.

[4]张琳,王民生.低浓度己内酰胺对作业工人健康影响的调查[J].化工劳动保护(工业卫生与职业病分册),1998,19(3):98-101.

Determination of Residual Caprolactam in Salvianolic Acid B Bulk Drug by HPLC

Chen Hongnan Deng Ying Guo xiujuan Hua Guodong*(Dept.of Pharmacy,Dongfang Hospital of Beijing University of TCM,Beijing 100078,China)

Objective:To establish a method to determine residual caprolactam in Salvianolic acid B bulk drug.Methods:The HPLC was performed on a Agilent 1200 chromatographic instrument with Zorbax SB-C18column.The chromatographic condition was described as below:the mobile phase was acetonitrile-water=11∶89(v/v)at 1.0mL·min-1,the data was recorded at 210nm,the column was maintained at 25℃,the inject volume was 10μL.Result:Caprolactam can be separated completely with good linear relationship between 0.00123~0.0502g·L-1.The average recovery of caprolactam was 100.28%with RSD=1.63% (n=9).Conclusion:This method is simple,reproducible and accurate enough for determination of residual caprolactam in salvianolic acid B bulk drug.

Salvianolic acid B bulk drug Residual caprolactam HPLC

R284.1

A

1672-8351(2016)02-0018-02

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