于可响，马秀丽，袁小远，刘存霞，胡 峰，凌红丽，李玉峰，黄 兵

（1山东省农业科学院家禽研究所/山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室，济南 250023；2青岛蔚蓝生物股份有限公司，山东青岛 266061）

鸭坦布苏病毒鸡胚弱化毒株的选育

于可响1，马秀丽1，袁小远1，刘存霞1，胡 峰1，凌红丽2，李玉峰1，黄 兵1

（1山东省农业科学院家禽研究所/山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室，济南 250023；2青岛蔚蓝生物股份有限公司，山东青岛 266061）

【目的】将鸭坦布苏病毒BZ_2010株在SPF鸡胚上进行连续传代致弱，旨在选育安全性高、免疫原性好的活疫苗候选毒株。【方法】以SPF鸡胚为增殖宿主，将BZ_2010株连续传代，直至第120代，以1日龄雏鸭和30周龄的产蛋种鸭为试验对象，对第120代次毒株（命名为VC2）的安全性进行评价；以1d雏鸭为试验对象，对VC2株的返强情况进行评价；以18周龄的种鸭为试验对象，对VC2株免疫后的中和抗体进行监测；以25周龄的种鸭为试验对象，对VC2株免疫后的保护效果进行评价；利用RT-PCR方法分别扩增BZ_2010株和VC2株的E基因和NS4A基因，进行测序分析。【结果】传代病毒对鸡胚的平均死亡时间逐渐缩短，而病毒毒价有逐渐提高的趋势，ELD50由第20代的10-5.3/0.1mL提高到第120代的10-5.8/0.1mL，而且第80代之前提高较快，后期基本稳定。将VC2株通过颈部皮下接种1d雏鸭和肌肉接种30周龄产蛋种鸭，接种后试验鸭无异常临床表现，肝脏也无明显病理变化，这说明VC2株具有良好的安全性。将VC2在1d雏鸭进行连续5次传代，未发现试验鸭有任何异常症状，将第5代组织悬液接种1d雏鸭，采集肝脏进行病理切片观察，发现无明显病理变化，这说明VC2株具有良好的稳定性。……