张泽生，王春龙，刘清岱，*，王宝林（.天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457；.天津岂均生物科技有限公司，天津300480）

扩增子测序技术分析红茶菌中优势微生物的研究

张泽生1，王春龙1，刘清岱1，*，王宝林2
（1.天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457；2.天津岂均生物科技有限公司，天津300480）

红茶菌作为一种传统健康保健饮品，由于发酵过程中需要多种微生物的参与，因此需要对混合菌种进行高效的分离鉴定。本文通过提取红茶菌中的基因组DNA，采用高通量测序的方法对16S rDNA和ITS的扩增子进行测序，实现对红茶菌中优势微生物的分析鉴定。通过对可操作分类单元进行丰度分析和物种分类树统计，最终得到主要的细菌组成为：醋酸菌89.11%，拟杆菌5.56%，颤螺旋杆菌1.77%；优势真菌组成为：酵母菌为93.48%，其中嗜酒假丝酵母61.76%，酵母菌Blastobotrys adeninivorans 30.97%；α多样性分析结果显示：测序数据较为合理，测序数据量大，可以反映样品中绝大多数的微生物物种信息。

红茶菌；扩增子测序；16S；ITS

红茶菌是一种以糖茶水为原料，由醋酸菌、酵母菌等微生物共同发酵而制成的功能饮料，是一种纯天然的健康保健饮品［1-2］。目前对于红茶菌中混合菌种研究主要依靠传统的微生物平板培养方法，这限制了很多微生物物种的分离鉴定，并且依赖表观性状对物种进行鉴定也可能导致误认［3］。

扩增子测序就是通过PCR扩增，将目标区域DNA富集后进行高通量测序的研究策略。16S rDNA是最适于细菌系统发育和分类鉴定的指标，采用16S rDNA扩增子测序是利用保守区设计通用引物进行PCR扩增，然后对高变区进行测序分析和菌种鉴定，成为研究环境样品中微生物组成结构的重要手段［4-5］。……