陈　琛，于　威,b，史利利,b，巩成见,b，蒋　磊,b，童富淡,b

(浙江理工大学，a.生物化学研究所； b.浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州 310018)



Bmp24缺失对家蚕核型多角体病毒基因组的复制、转录及病毒组装的影响

陈琛a，于威a,b，史利利a,b，巩成见a,b，蒋磊a,b，童富淡a,b

(浙江理工大学，a.生物化学研究所； b.浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州 310018)

研究Bmp24基因的生物学功能，利用Red重组技术和Bac-to-Bac系统构建Bmp24缺失型病毒(Bmp24-ko-Bacmid)和Bmp24修复型病毒(Bmp24-re-Bacmid)。然后将Bmp24-ko-Bacmid、Bmp24-re-Bacmid以及野生型病毒(wtBacmid)分别转染BmN细胞，病毒滴度测定发现3种病毒都能产生有活力的子代病毒并使细胞发病，但Bmp24-ko-Bacmid在各个时相的滴度值显著低于其他两种病毒(P<0.05)。电镜观察结果发现Bmp24-ko-Bacmid感染的细胞中只有少量细长的杆状结构，而其他两种病毒感染细胞后能够产生大量具有囊膜包裹的成熟病毒粒子。qPCR实验结果显示，Bmp24缺失不会影响病毒基因组的复制，同时qRT-PCR结果显示Bmp24缺失使早期、晚期基因和极晚期基因的转录水平显著低于野生型病毒(P<0.05)。

家蚕核型多角体病毒；Bmp24基因；Red重组系统；Bac-to-Bac系统

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杆状病毒(baculovirus)是一类具有囊膜包裹的双链DNA大型病毒，感染的宿主种类达到600多种，是已知昆虫病毒中最大的类群。杆状病毒属于杆状病毒科，这一病毒家族分为4大类[1]：α-杆状病毒属Alphabaculovirus (lepidopteran-specific nucleo-polyhedrovirus NPV)、β-杆状病毒属Betabaculovirus(lepidopteran-specific gran-uloviruses)、γ-杆状病毒属Gammabaculovirus (hymenopteran-specific NPV)、δ-杆状病毒属Deltabaculovirus (dipteran-specific NPV)。

家蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinucleopolyhedrovirus, BmNPV)(T3株)是Alphabaculovirus的成员之一，自从该病毒基因组测序完成之后[2]，对其分子生物学上的研究非常多，尤其是对基因组中保守基因的功能研究颇多。至今为止，大约有65%的基因被报道，例如调控基因lef-3[3]、lef-1[4]、lef-11[5]等；结构基因Ac143[6]、ODV-E56[7]、Bm60[8]、38K[9]、Bm67[10]、和Bm91[11]等。

p24基因在苜蓿夜蛾核型多角体病毒(Autographcalifornicamultiple nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)和黄衫毒蛾核型多角体病毒(Orgyiapseudotsugatamulticapsid nucleopolyhedrovirus,OpMNPV)[12]中都是位于多角体膜蛋白基因区域连续表达的5个晚期开放阅读框(open reading frame ORF)中的第一个，预期蛋白分子量大小为21.2KDa。在OpMNPV中p24基因编码了一种核衣壳相关蛋白[13]；……