周格琛，韦美德，贺望娇，韦鸿健，梁委军

(广西医科大学第四附属医院/柳州市工人医院检验科，广西柳州 545005)



·经验交流·

Sysmex XE-5000血液分析仪检测血小板的应用探讨

周格琛，韦美德，贺望娇，韦鸿健，梁委军

(广西医科大学第四附属医院/柳州市工人医院检验科，广西柳州 545005)

目的探讨Sysmex XE-5000全自动血液分析仪(AHA)检测血小板的准确性以及假性异常的原因和纠正措施。方法用Sysmex XE-5000 AHA以常规方法(电阻抗法即PLT-1模式)对患者血小板进行检测，随机选择血小板直方图及红细胞(RBC)直方图均正常的50例标本作为试验组1，另外选择血小板直方图异常或(和)RBC直方图异常的50例标本作为试验组2，然后对试验组2的各标本逐一在Sysmex XE-5000 AHA上以荧光染色激光散色法(光学法即PLT-O模式)检测血小板作为试验组3，仪器检测的3个组数据分别与手工法进行比较。结果在试验组1中，仪器的检测结果与手工计数差异无统计学意义(P>0.05)，而试验组2仪器的检测结果与手工计数差异有统计学意义(P<0.05)，试验组3仪器的检测结果与手工计数差异无统计学意义(P>0.05)。结论Sysmex XE-5000 AHA检测血小板的结果准确、可靠，但需要熟练掌握其影响因素和仪器的性能及检测原理，才能为临床提供准确、可靠的检验报告。

血液分析仪；血小板计数；电阻抗法；光学法

随着科学技术的发展，各大中小型医院的实验室血小板计数(PLT)大多使用血液分析仪自动检测，工作效率得以大幅度提高并减轻了劳动强度，然而其影响因素不容忽视。本文探讨了Sysmex XE-5000 AHA检测血小板的准确性以及假性异常的影响因素和纠正措施，现报道如下。

1　材料与方法

1.1标本来源选择2015年11月6日根据医嘱需做血细胞分析计数的住院患者296例，在凌晨6：00～7:00由病区护士抽取其静脉血2 mL于乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)真空抗凝管中，轻轻混匀，在室温状态下4 h内完成所有检测。

1.2仪器与试剂Sysmex XE-5000 AHA及其原装进口配套试剂；1%草酸铵血小板稀释液(草酸铵1 g、EDTA-Na20.012 g、4%甲醛溶液0.1 mL，蒸馏水加至100 mL。配成后多次过滤，空白计数为“0”，4 ℃冰箱保存)。

1.3方法以Sysmex XE-5000 AHA对患者标本进行全血细胞计数及五分类检测。分析前，用Sysmex公司提供的原装高、低2种e-CHECK质控液做室内质控，确认仪器和试剂处于正常状态，严格按照仪器的标准操作程序(SOP)进行常规标本检测。随机选择血小板直方图及红细胞(RBC)直方图均正常的50例标本作为试验组1，另外选择血小板直方图异常或(和)RBC直方图异常的50例标本作为试验组2，然后对试验组2的各标本逐一在Sysmex XE-5000 AHA上应用PLT-O模式检测血小板作为试验组3。记录3个试验组的血小板数值。同时让两名技术熟练的主管技师对以上2组标本采用双盲法进行血小板手工计数：按《全国临床检验操作规程》(第3版)，以微量吸管准确吸取经混匀的全血20 μL于0.38 mL草酸铵血小板稀释液中，轻轻混匀，10 min后再次轻轻混匀混悬液，充入计数池，静置15～20 min，在光学显微镜高倍镜下精确计数中间大方格中5个中方格里的血小板，对于压边线的血小板，采取数上不数下、数左不数右的原则，按公式(PLT/L=5个中方格里的PLT×5×10×20×106)计算出各标本的血小板数，取两名主管技师的均值作为血小板手工计值并与仪器的检测结果作比较。

2　结　　果

各组测定的血小板结果见表1。在试验组1中，仪器的检测结果与手工计数差异无统计学意义(P>0.05)，而试验组2仪器的检测结果与手工计数差异有统计学意义(P<0.05)，试验组3仪器的检测结果与手工计数差异无统计学意义(P>0.05)。

表1　　3个试验组仪器测定的血小板数值与手工计数的比较

3　讨　　论

Sysmex XE-5000 AHA有2种血小板检测模式，即PLT-I和PLT-O。PLT-I模式的检测原理是被稀释的血细胞均匀混悬液在恒定负压的作用下，以颗粒经过RBC/PLT小孔时电阻抗脉冲信号的变化为基础对血小板进行计数和体积测定，其缺点是不能完全排除体积和光学特征与血小板相似的非血小板颗粒干扰。试验组1证实在正常情况下其检测结果是可靠的，然而试验组2提示其尚不能完全排除小RBC和(或)RBC碎片等的干扰，血液中RBC数量远远多于血小板，即使有少部分RBC或RBC碎片被仪器误计数入血小板范围内，也会给检测结果造成较大的影响，导致PLT假性增多。从试验组3可以看出在血小板或(和)RBC直方图异常的情况下，仪器通过PLT-O模式测定血小板的结果与手工计数差异无统计学意义(P>0.05)，即在此模式下仪器的检测结果依然是可靠的，这是由于PLT-O模式设置有专用的RET/PLT-O石英毛细管通道，并以Plymethine和Oxazine对血小板进行核酸荧光染色，应用半导体激光与流式细胞技术，对各血小板逐一从高低角度进行二维激光扫描，即以低角度散射光(前向散射光)检测颗粒的数量和体积，高角度散射光(侧向散射光)的不同波长荧光散射强度反映被检颗粒的RNA信息，最后综合分析来自各散射光的信息，排除非血小板颗粒的干扰，从而准确检测到血小板的数量及其各项参数[1]。因此建议发现血小板结果有异常或其直方图和(或)RBC直方图异常时，用PLT-O模式复查，让结果更加真实、可靠。

Sysmex XE-5000AHA以PLT-O模式检测血小板的准确性是相对的，在实际工作中，遇到首次PLT结果减低或者骤然下降的病例应注意观察标本是否有凝块，询问临床护士抽血是否有不顺利，若回答是否定的，则需涂片染色镜检以排除血小板聚集或血小板卫星现象，避免PLT假性减少而导致临床误诊误治[2]。血小板卫星现象是指血小板黏附并围绕于中性粒细胞、单核细胞或淋巴细胞表面的现象。该现象偶尔见于EDTA抗凝血中，产生的原因可能是EDTA与免疫球蛋白相互作用并且非特异性地结合于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，这种血小板结合的自身抗体Fc端能够与中性粒细胞、淋巴细胞或单核细胞膜上的Fc受体相结合[3]。血小板卫星现象是全自动血液分析仪检测血小板假性减少的原因之一，而血小板大量聚集又是另外一个重要的影响因素，主要见于EDTA依赖性假性血小板减少(EDTA-PTCP)，文献报道其发生率不到0.2‰，然而在住院患者中的发病率可高达0.8‰左右，平均为0.5‰[4]，EDTA-PTCP产生的原因可能与血小板表面存在的某些隐匿性抗原有关。EDTA是血常规最好的抗凝剂，但在特定环境下会导致血小板活化，使其形态由正常的圆盘形转变为球形，从而改变了血小板膜表面上的某些隐匿性抗原的结构，与存在于血浆中的自身抗体相结合，激活花生四烯酸(AA)、磷脂酶C(PLC)、磷脂酶A2(PLA2)、5-羟色胺(5-HT)和二磷酸腺苷(ADP)等活性物质，进而活化血小板纤维蛋白受体(FIB-R)，促进血小板与纤维蛋白原相互聚集成团而无法随鞘液逐一通过RET/PLT-O石英毛细管通道，导致仪器检测结果远低于实际数值[5]。对于血小板卫星现象或EDTA-PTCP的标本该如何处理有待进一步探讨。有文献报道，在EDTA抗凝血中加入一定量的氟化钠或者丁胺卡那霉素1 h内可有效抑制血小板的聚集或解离已聚集的血小板,1 h后其解离效果较差[6]。笔者认为也可以采集末梢血以草酸铵法手工计数血小板或尝试改用枸橼酸盐抗凝血上机检测，目的在于为临床检验工作者遇到EDTA-PTCP时提供方便、有效的解决方案。

全自动血液分析仪的应用给繁重的医学检验工作带来了巨大的便利，但在仪器使用前应对其进行校准和性能验证，工作人员经培训后考试合格方能上岗，在日常工作中严格按照SOP进行操作，定期对设备进行维护和保养，熟练掌握血液学检验的相关理论知识，了解仪器的性能和检测原理并制订出行之有效的复检规则，才能为临床提供准确、可靠的检验报告。

[1]李勇，慕悦意，夏永辉，等．SysmexXE-5000血液分析仪对血液疾病血小板检测的应用价值[J]．中国血液流变学杂志，2011，21(2)：329-332,369．

[2]张蕾，李晶华，李智，等．Sysmex XE-2100全自动血液分析仪对低值血小板检测应用探讨[J]．中华检验医学杂志，2010，33(5)：457-459．

[3]刘成玉，罗春丽，吴晓蔓，等．临床检验基础[M]．5版．北京：人民卫生出版社，2013：70．

[4]郑军，黄秀霞．乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症简易纠正方案[J]．检验医学与临床，2015，12(2)：177-178,181．

[5]邓向海，李柯萱．过敏患者EDTA依耐性血小板假性减少症1例[J]．国际检验医学杂志，2015，36(5)：718-719．

[6]胡先泳，张宏伟．探讨药物对EDTA依赖性血小板聚集的抑制和解离作用[J]．临床血液学杂志(输血与检验版)，2014，27(2)：272-274．

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.058

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