满建梅，郭军堂，张代娟，陈安琪

(潍坊医学院临床医学院，潍坊　261053)



A53T α-synuclein抑制SH-SY5Y细胞2型囊泡单胺转运体的表达

满建梅，郭军堂，张代娟，陈安琪

(潍坊医学院临床医学院，潍坊261053)

目的研究稳定表达A53T α-synuclein对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中2型囊泡单胺转运体(VMAT2)蛋白表达的影响。方法构建A53Tα-synuclein真核表达载体，用脂质体lipofectamineTM2000转染SH-SY5Y细胞，经G418筛选获得稳定转染单克隆细胞株；分别采用 Western blotting及DCFH-DA染色检测细胞系A53T α-synuclein过表达对VMAT2蛋白的表达及细胞内活性氧类物质(ROS)水平的影响。结果Western blotting结果显示VMAT2的表达在稳定表达A53T α-synuclein的细胞系中明显降低。DCFH-DA染色结果显示稳定表达A53T α-synuclein细胞系内DCF signal (507.3±7.1)较对照组 (410.7±10.5)明显增多 (P<0.05)。结论A53T α-synuclein能够通过抑制VMAT2的表达，增加细胞内的ROS水平,在帕金森病的发病过程中发挥重要作用。

帕金森氏病；A53T α-synuclein；VMAT2

帕金森氏病(Parkinson′s disease, PD)的主要病理特征是黑质多巴胺能神经元的选择性变性及Lewy body(LB)的形成，α-synuclein是LB的重要成分[1]。A53T α-synuclein是人们在常染色体显性家族PD患者中发现的突变体[2]，与PD的发病密切相关，但具体机制还不清楚。研究发现A53T α-synuclein可与VMAT2在体外发生特异性分子间相互作用[3]，提示A53T α-synuclein参与了多巴胺(DA)的代谢调节过程，在PD的多巴胺神经元选择性变性过程中发挥作用。本研究目的是建立稳定表达A53T α-synuclein的细胞系，并研究其对VMAT2蛋白表达的影响， 为研究PD的发病机制提供新思路。

1　材料和方法

1.1材料

神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞购自中国医学科学院基础所细胞中心；携带A53T α-synuclein的T载体及β-半乳糖苷酶的pcDNA3.0-Lacz真核细胞表达载体为本室保存；LipofectamineTM2000购自Gibco BRL；山羊抗人VMAT2多克隆抗体、小鼠抗人α-synuclein多克隆抗体、小鼠抗人β-actin单克隆抗体购自Santa Cruz；辣根酶(HRP)标记IgG购自中杉金桥； XhoI、HindIII、T4DNA连接酶、高保真Pyrobest DNA聚合酶购自大连宝生物；……