段广亮 王凯峰 戴辉萍 唐婷婷 丁飞

喉癌干细胞的新型培养纯化方法及临床应用前景

段广亮 王凯峰 戴辉萍 唐婷婷 丁飞

目的 通过含生长因子的无血清培养基（SFM）培养Hep-2喉癌细胞，分离并扩增肿瘤干细胞，为进一步制备放疗增敏剂做基础研究。方法 含生长因子的无血清培养基（SFM）培养Hep-2喉癌细胞，流式细胞仪检测细胞中侧群细胞的比例。当侧群细胞比例达25%时，收集全部细胞球，FACS筛选出CD133+、CD44+细胞作为喉癌干细胞。结果 成功培养出侧群细胞，流式细胞仪检测其比例达26.2%，FACS筛选出CD133+CD44+细胞的比例均＞91%。结论 成功培养出高浓度喉癌干细胞。

无血清培养基 重组表皮生长因子 成纤维生长因子 侧群细胞

肿瘤干细胞是肿瘤中少数具有自我更新、无限增殖及多向分化潜能的细胞，且固有放射抵抗能力，而其它肿瘤细胞群并不增殖或数次增殖后自然凋亡。因此一般认为肿瘤干细胞是肿瘤发生发展和放射抵抗的根源［1～4］。近年成功分离鉴定近10种肿瘤干细胞，鉴别肿瘤干细胞目前常用的方法是对富集肿瘤细胞表面特殊抗原的识别，头颈部鳞状细胞癌表面标志物的研究较少，较为认可的“标志”细胞是流式细胞仪检测的侧群细胞（肿瘤干细胞样细胞）和CDl33+、CD44+肿瘤细胞［5］，但分选效果不佳，作者自2010年6月至2012年3月结合自身试验条件及喉癌干细胞的特点通过长期实验摸索分两步培养纯化喉癌干细胞，成功的经流式细胞仪分选出具有较高浓度CDl33+、CD44+喉癌干细胞。报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 Anti-CD44-FITC（美国eBioscience公司）；……