刘贝贝，张 霄，谢雅晶，焦凌霞，刘 媛，张存政，赵岩岩，武爱华，刘贤金

（1南京农业大学植物保护学院，南京 210095；2江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品量安全控制技术与标准重点实验室，南京 210014；3河南科技学院食品学院，河南新乡 453003）

Bt Cry1类毒素共性结构域的分析、表达及鉴定

刘贝贝1，2，张 霄2，谢雅晶2，焦凌霞3，刘 媛1，2，张存政2，赵岩岩2，武爱华2，刘贤金1，2

（1南京农业大学植物保护学院，南京 210095；2江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品量安全控制技术与标准重点实验室，南京 210014；3河南科技学院食品学院，河南新乡 453003）

【目的】分析定位Bt Cry1类毒素Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1B、Cry1C、Cry1F的共性结构域，克隆并表达共性结构域蛋白，为筛选Bt毒素广谱抗体及建立广谱检测方法打下基础。【方法】利用生物信息学和分子模拟技术，通过SWISS-MODEL同源建模分别对5种Cry1类毒素进行三维建模，并结合Ramachandran plot、ERRAT和Verify3D方法评价模型构象的合理性。通过分析比对5种Cry1类毒素的三维结构，确定Domain I 区域作为5种Cry1毒素的共性结构域。以含Cry1Ac基因的苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种为模板设计引物，PCR扩增获得共性结构域Domain I基因，将其经Nco I和Not I双酶切连接至原核表达载体pET-26b（+），构建原核表达载体pET-26b-Domain I。重组质粒经菌液PCR、双酶切以及测序鉴定验证正确后，转化至E.coli BL21 （DE3），经终浓度为1 mmol·L-1的IPTG在20℃下诱导表达16 h后检测共性结构域蛋白的表达情况。……