刘　培，宋礼华，，范清林，刘道琴，张　伟，魏　利，赵　婷

不同CHO工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸化修饰的研究

刘培1，宋礼华1，2，范清林2，刘道琴2，张伟2，魏利2，赵婷2

目的 比较中国仓鼠卵巢细胞（CHO）工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异，为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法 从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量：酸水解释放出的唾液酸用荧光试剂1，2-diamino-4，5-methylenedioxybenzene（DMB）衍生后，采用荧光-亲水保留液相色谱（HILIC-FLD）检测。寡糖链的结构分析：糖苷酶PNGase F释放出的寡糖链经邻氨基苯甲酰胺（2-AB）衍生后，一部分利用阴离子交换色谱原理分析寡糖链上唾液酸的平均数；一部分经HILIC原理分析VEGFR-Fc寡糖链指纹图谱。结果 6株工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸含量在3～12 mol NANA/mol蛋白之间，参考品Aflibercept为10.46 mol NANA/mol蛋白；每个寡糖链的唾液酸平均数在0.28～1.0之间；寡糖链的特征指纹谱图显示VEGFR-Fc有12个共有峰，各样品、参考品均有以上共有峰，但各峰的峰高有差异。结论 不同的CHO工程细胞株所表达的糖蛋白的唾液酸化程度存在差异。

唾液酸；唾液酸化；糖基化；HILIC-FLD

网络出版时间：2016-5-9 15：43：10 网络出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160509.1543.008.html

糖蛋白是蛋白质在翻译后经过糖基化修饰形成，被广泛应用于治疗各种疾病，占据着较大的市场。糖基化作为蛋白质翻译后的主要修饰之一，调节并稳定蛋白构象，增加其可溶性，介导受体对蛋白的识别作用，影响蛋白类药物的生物学活性［1-2］。因此，有必要对糖蛋白类生物药物的糖基化修饰进行系统研究，其中唾液酸化程度的监控尤为重要。……