侯金霞，李志平，丁国胜，魏莲花，丁进芳（甘肃省人民医院，甘肃 兰州 730000）

多参数流式细胞术在慢性淋巴细胞白血病中的应用

侯金霞，李志平，丁国胜，魏莲花，丁进芳
（甘肃省人民医院，甘肃 兰州 730000）

目的 分析多参数流式细胞术免疫分型在慢性淋巴细胞白血病（CLL）中的应用价值，为临床提供可靠的诊断依据。方法 收集我院2011年3月至2016年3月初诊CLL患者60例（CLL组），同时以60例增生性贫血患者为对照（贫血组）。使用多参数流式细胞术测定其免疫型，评价免疫型特征。结果 CLL组患者HLA-DR+、CD5+和CD22+均为45例，CD19+38例（63.33%），CD20+46例（76.67%），CD23+35例（58.33%），CD11c+22例（36.67%），CD38+7例（11.67%），CD11b+28例（46.67%），与贫血组比较，差异有显著性。但CD10和FMC7在CLL组和贫血组均无阳性表达，差异无显著性。结论 多参数流式细胞术免疫分型检测CLL相关抗原，可协助临床准确及时诊断和评估预后。

慢性淋巴细胞白血病；多参数流式细胞术；免疫分型

慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）是一种以体积小而形态成熟的淋巴细胞在外周血、骨髓和外周淋巴器官中克隆性增殖为特点的恶性疾病。2008年，WHO造血与淋巴组织肿瘤分类［1］中定义CLL均为B细胞型。该病在欧美国家发病率很高，近年来，随着先进技术的应用和对该病诊断水平的提高，我国患病率呈逐年上升趋势［2］。本研究利用多参数流式细胞术检测CLL患者免疫型表达情况，以协助临床诊断和评估预后。

1　对象与方法

1.1对象

收集我院2011年3月至2016年3月初诊CLL患者60例（CLL组），男39例，女21例，年龄38～82岁，中位年龄63岁，＞60岁者44例。以60例临床确诊为增生性贫血患者为对照（贫血组），男40例，女20例，中位年龄56岁。CLL诊断符合3版《血液病诊断及疗效标准》［3］。鉴别诊断主要参考Moreau等［4］提出的免疫表型积分系统，见表1，典型CLL积4～5分。本研究经医院伦理委员会批准，纳入患者均签署知情同意书。

表1　CLL免疫表型积分系统

1.2研究方法

1.2.1试剂与仪器鼠抗人单克隆抗体CD45-PE、CD38-PE、CD20-FITC、CD10-FITC、CD5-FITC、FMC7-FITC、CD19-PE、CD3-PE、CD22-PE、CD23-APC、CD33-APC、HLA-DR-APC，阴性对照抗体小鼠IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG1-Percp、IgG1-APC试剂和FACS Calibur多参数四色流式细胞仪（美国Becton Dickinson公司），光学显微镜BX-53 limps（日本Olympus公司）。

1.2.2方法 经无菌骨髓穿刺取0.2 ml骨髓液，涂片，瑞—姬氏染色，光镜下进行骨髓细胞形态学实验室诊断。另取2～4 ml骨髓液置于肝素钠抗凝管，用四色流式细胞仪的Cell Quest软件获取每管10 000个细胞进行分析，对数取样，通过CD45设门圈定淋巴细胞群，阳性水平根据FITC-/PE-/Per-cp-/APC-自发荧光范围确定。流式细胞术检测结果以荧光强度＜102为阴性，102～103为弱阳性，＞103为强阳性，膜抗原≥20%为表达阳性。

1.3统计学分析

采用病例对照研究，以Excel软件和SPSS 16.0进行统计学分析。计数资料以百分率表示，CLL组与贫血组免疫分型结果采用Fisher确切概率法。以P＜0.05为差异有显著性。

2　结果

流式细胞术检测发现，HLA-DR+59例（98.33%），CD5+和CD22+均为45例（75.00%），CD19+38例（63.33%），CD20+46例（76.67%），CD23+35例（58.33%），CD11c+22例（36.67%），CD38+7例（11.67%），CD11b+28例（46.67%），与贫血组比较，差异有显著性（P＜0.05）。但是，CD10和FMC7在CLL组和贫血组均无阳性表达，差异无显著性（P=1.000）。见表2。

3　讨论

（1）CLL是一种恶性度较低的单克隆淋巴细胞增殖性疾病，临床和病理表现往往有很大的异质性。近年来，随着我国人口老龄化，CLL发病率有逐年上升趋势，并且随着年龄的增长而增加。本研究发现，我院初诊的60例CLL患者中位年龄为63岁，其中＞60岁44例，也是以老年人为主。

（2）流式细胞术白血病免疫分型是一种定量分析技术，利用荧光标记的单克隆抗体作为分子探针，多参数分析白血病细胞的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及分化程度。本研究采用CD45设门圈定淋巴细胞群，进而对其免疫型进行分析，由于CLL患者的淋巴细胞具有特征性表型［5］，B-CLL起源于B淋巴细胞恶性转化和克隆，按照WHO诊断标准［1］，我们纳入的CLL患者均为B细胞型，即CD19+、CD5+，同时表达CD23、CD20，弱表达或不表达CD22或CD79b，不表达FMC7。本次研究发现，59例（98.33%）患者表达HLA-DR，高表达CD5、CD22、CD19、CD20、CD23、CD11c、CD11b，分别为45例（75.00%）、45例（75.00%）、38例（63.33%）、46例（76.67%）、35例（58.33%）、22例（36.67%）、28例（46.67%）。CD5+、CD23+是CLL的典型特征，本实验中二者双阳性为35例（58.33%），与贫血组比较，差异有显著性。同时，CD10和FMC7在CLL组和贫血组均无阳性表达，差异无显著性，与姚建新等［6］的研究结果基本一致。

表2　两组免疫分型结果比较［n（%）］

（3）CD38表达于前体B细胞，是一种促使白细胞活化和增殖的II类跨膜糖蛋白，是CLL侵袭性的重要标志，具有独立的预后意义。目前大部分研究认为CD38表达与CLL预后呈负相关［7］，CD38+的CLL患者生存期明显缩短，显示出明显的激活和疾病进展状态。本次实验中由于CD38+的CLL患者仅7例（11.67%），因此需扩大检测标本量进一步验证其预后意义。

（4）总之，多参数流式细胞术可以协助临床医师对CLL进行诊断、评估预后，具有重要的临床意义，有利于进一步研究不同临床分期和药物治疗前后其免疫型变化，促进对CLL的认识与评价。

［1］Steven H S，Elias C，Nancy L H，et al.World Health Organization Classification of Tumours of Hematopoietic and Lymphoid Tissues［M］.Lyon：IARC Press，2008.

［2］邱录贵.慢性淋巴细胞白血病治疗模式的转变［J］.中华血液学杂志，2014，35（4）：275-277.

［3］张之楠.血液病诊断及疗效标准［M］.3版.北京：科学出版社，2007.

［4］Moreau E J，Matutes E，A’Hern R P，et al.Improvement of the chronic lymphocytic leukemia scoring system with the monoclonal antibody SN8 （79a）［J］.Am J Clin Pathol，1997，108（4）：378-382.

［5］刘艳荣，常艳，王卉，等.慢性淋巴细胞白血病免疫表型分析［J］.中华检验医学杂志，2003，26（1）：17-20.

［6］姚建新，李建勇.126例慢性淋巴细胞白血病免疫表型分析［J］.中国血液流变学杂志，2016，16（3）：367-372.

［7］Delpoeta G，Maurilb I，Venditti A，et al.Clinical significance of CD38 expression in chronic lymphocytic leukaemia［J］.Blood，2001（98）：2633-2639.

R551.2

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1671-1246（2016）15-0143-02