万雷，　黄宏兴，　黄红，　柴生颋，　魏合伟，　张志海，　王吉利

（1.广州中医药大学附属骨伤科医院，广东广州　510240；2.广州中医药大学，广东广州　510405）

过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体的构建及其对MG63细胞和相关蛋白的影响

万雷1，黄宏兴1，黄红2，柴生颋1，魏合伟1，张志海1，王吉利2

（1.广州中医药大学附属骨伤科医院，广东广州510240；2.广州中医药大学，广东广州510405）

【目的】针对Wnt信号通路抑制因子Dickkopf（DKK）1、骨硬化蛋白Sclerostin（Sost）基因构建过表达重组腺病毒载体，观察其对MG63细胞和相关蛋白的影响。【方法】构建DKK1、Sost过表达重组腺病毒载体，将培养好的MG63细胞分为空白对照组、空载病毒组（NC对照组）、过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组5组，根据组别不同分别用上述过表达重组腺病毒感染MG63细胞，观察细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性、钙离子浓度和骨调节蛋白表达情况。【结果】与空白对照组比较，过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组的细胞光密度值、ALP活性值均显著降低，而钙离子浓度显著升高，以过表达DKK1+Sost组变化最明显（P＜0.01）。与空白对照组比较，过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组的骨保护蛋白（OPG）、低密度脂蛋白受体相关蛋白（Lrp）5、骨形态发生蛋白（BMP）2、结缔组织生长因子（CTGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）2、骨桥蛋白（OPN）表达量均降低，而肿瘤坏死因子（TNF）-α表达量则升高，以过表达DKK1+Sost组变化最明显，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。【结论】过表达DKK1、Sost可降低MG63细胞增殖和ALP活性，升高钙离子浓度，对骨调节蛋白有一定影响，尤以两者同时过表达时的作用最强。

DKK1；Sost；过表达基因；腺病毒；MG63细胞；细胞培养

骨质疏松症（osteoporosis，OP）是由于年龄增加，性腺功能减退所导致的骨代谢疾病，严重危害老年人的健康。……