谢丽，　赵树进，　严华成，3，　石磊

（1.广州军区广州总医院药剂科，广东广州　510010；2.广州中医药大学，广东广州　510006；3.广州军区疾病预防控制中心，广东广州　510507）

·基础研究·

一种简单高效的新生鼠海马神经元原代培养方法

谢丽1，2，赵树进1，严华成1，3，石磊1

（1.广州军区广州总医院药剂科，广东广州510010；2.广州中医药大学，广东广州510006；3.广州军区疾病预防控制中心，广东广州510507）

【目的】建立一种简单、高效、高纯度的新生小鼠海马神经元的原代培养方法。【方法】取出生24 h内的C57BL/6J新生鼠，分离海马组织，采用胰蛋白酶消化加机械吹打的方法获得单个细胞，用含体积分数1%B27及2%Glutamax-100X、终浓度25 μmol/L Glutamate的Neurobasal-A培养基接种培养，3 d后用去Glutamate成分的上述培养基换液，并加阿糖胞苷作用48 h以抑制胶质细胞增长。于倒置相差显微镜下观察细胞的生长状态，采用微管蛋白相关标志物2（MAP2）及Hoechst 33258免疫荧光染色鉴定神经元纯度。【结果】此培养方法获得的海马神经元生长状态良好，细胞形态从接种时的圆形透亮、无突起，到培养第7天后发展为神经元胞体聚集、树突发达并形成纵横交错的神经网络；经鉴定，神经元的纯度高达97.2%以上，且能稳定存活2～3周。【结论】该方法操作简单、高效，所得神经元纯度高，结果稳定。

海马神经元；原代培养；新生小鼠

海马是大脑边缘系统的一个重要部分，参与记忆、学习、认知、情绪等多种高级精神活动［1］。体外培养海马神经元是目前研究阿尔茨海默病、癫痫、脑卒中等神经系统疾病的重要模型［2］。自1977 年Banker等［3］首次在体外成功分离并培养出海马神经元以来，海马神经元的体外分离培养技术一直在不断地发展和完善。……