杨　娜,王向军,乔　晴,徐　超

(河南出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河南郑州450003)

变性高效液相色谱技术鉴别猪牛源性成分的试验

杨娜,王向军,乔晴,徐超

(河南出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河南郑州450003)

建立了检测动物源性食品中猪、牛成分的PCR结合变性高效液相色谱技术,为牛、羊成分的鉴别提供一种新的分子诊断技术.以猪、牛的线粒体DNA为靶基因,设计特异性PCR引物.双重PCR扩增后,DHPLC分析.经优化DHPLC最佳条件为:使用PS-DVB&C18 DNASep色谱柱(4.6 mmX50 mm,粒度3 μm),设定50℃柱温,起始流动相为: 45%缓冲液A和55%缓冲液B,流速0.9 mL/min;上样量:PCR产物5 μL.结果表明:DHPLC法具有良好的特异性,仅能检出猪、牛源成分,而与羊、鸡、鸭源成分无交叉反应;方法的灵敏度可以达到1 000 copies核酸.

变性高效液相色谱法;猪源性成分;牛源性成分;鉴定

我国已经成为世界第一位的动物源性食品生产大国,在猪、牛源性食品生产的总量和增长幅度方面保持着全球第一.但受经济利益驱动,我国动物源性食品掺假的手段和花样在不断地翻新,甚至规模化肉制品掺假的现象也越来越严重.因此,基于食品安全、宗教原因和营养成分的考虑,有必要对动物源性成分来源鉴别和追溯研究,开发一种安全、快速、自动化、高通量的检测技术确有必要.

高效变性液相色谱技术(Denaturing high per⁃formance liquid chromatograph,DHPLC)是近年来发现起来的一种快速核酸分析方法[1].通过增加流动相中具有亲水性的乙腈浓度,逐渐造成DNA和TEAA的脱离,核酸片段就会按分子量大小洗脱而分离.用DHPLC可以区分……