刘晓菲（华北制药河北华民药业有限责任公司，河北藁城 052165）

生孢梭菌半固体培养基菌落计数方法的研究

刘晓菲
（华北制药河北华民药业有限责任公司，河北藁城 052165）

目的：建立使用半固体培养基进行生孢梭菌菌落计数的方法，使菌落计数结果能够接近最大活菌数。方法：接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐培养基中，30～35℃培养18～24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释生孢梭菌菌液至与标准比浊管相同的浓度，用10倍稀释法分别稀释至1×10-6、1×10-7、1×10-8三个稀释级备用。分别配制琼脂浓度为0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%的6种硫乙醇酸盐培养基，分别取三个稀释级的菌液1mL接种至配制好的上述6种硫乙醇酸盐培养基中，同时在胰酪大豆胨琼脂培养基上接种等量菌液，并放入厌氧袋中，将接种好的上述培养基至35℃培养18～24小时，进行菌落计数并比较结果。结果：半固体培养基计数法比厌氧袋计数法效果好，使用琼脂浓度为0.5%的硫乙醇酸盐培养基，30～35℃培养18小时，菌落计数最多，最接近最大活菌数。结论：生孢梭菌半固体培养基计数法适用于生孢梭菌计数。

生孢梭菌；半固体培养基；菌落计数

药品无菌检查所用的培养基质量是影响其试验结果的一个重要因素，因此应严格控制无菌试验所用培养基质量[1]。我国现行《中华人民共和国药典》（2015年版）[2]规定无菌检查所用培养基需进行灵敏度试验，采用接种小于100CFU（菌落形成单位）灵敏度检查用菌的方法。生孢梭菌是无菌试验培养基灵敏度检查的质控菌之一，但是其计数方法缺乏可操作性。……