银梅,孔令芸,张秋雨,丰兰竹,周洁,岳锋,王选年

(1.河南科技学院动物科学学院,河南新乡453003;2.新乡学院生命科学技术学院,河南新乡453003;3.新乡市红旗区动物疫病预防控制中心,河南新乡453003)

调查研究

鸡新城疫病毒(NDV-XX08)单克隆抗体的制备与鉴定

银梅1,孔令芸1,张秋雨1,丰兰竹3,周洁1,岳锋2,王选年2

(1.河南科技学院动物科学学院,河南新乡453003;2.新乡学院生命科学技术学院,河南新乡453003;3.新乡市红旗区动物疫病预防控制中心,河南新乡453003)

本研究采用鸡胚繁殖NDV-XX08,差速离心法纯化NDV,用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞与NS0细胞进行融合,用间接ELISA和血凝抑制试验(HI)进行筛选,挑选效价高的杂交瘤细胞进行克隆和亚克隆,建立阳性杂交瘤细胞株,最终得到一株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,命名为4F12.采用体外细胞培养和体内诱生腹水的方法制备了其McAb.对获得的单克隆抗体采用ELISA,HI,Western-Blotting方法进行鉴定.杂交瘤细胞培养上清和腹水的ELISA效价分别为1∶160和1∶3.2X104.获得的单克隆抗体与NDV具有良好的特异性反应,与鸡胚阴性尿囊液、鸡正常组织、鸡IgG、鸡传染性囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽流感检测抗原均无交叉反应性.HI试验表明,制备的单抗没有血凝抑制活性.Western-Blotting证明获得的单抗与新城疫病毒蛋白有特异性反应.经连续传代20次,冻存、复苏3次,4F12杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体.

鸡;新城疫病毒;单克隆抗体;Western-Blotting

鸡新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起禽类的一种急性传染病,是对养鸡业危害最大的传染病……