□ 魏昭 梁勃 吴蕊 孙琛 王权 衡水市食品药品检验检测中心

荧光定量PCR检测食品中沙门氏菌研究

□ 魏昭 梁勃 吴蕊 孙琛 王权 衡水市食品药品检验检测中心

实时荧光定量PCR技术（FQ-PCR）实现了PCR从定性到定量的飞跃，可对目标DNA分子起始拷贝数精确定量。因其检测方法精确、灵敏、污染途径少，已成为国际公认的核酸分子定量的标准方法，在食品中安全微生物的鉴定也有重要应用［1］。沙门氏菌是引起食物中毒最为常见的致病菌，因此，建立食品中沙门氏菌中荧光定量PCR检测方法有重要的研究意义。材料与方法 1菌株：鼠伤寒沙门氏菌（C77-31）有中科院微生物所提供，肉类、奶制品等产品均购于农产品市场。2主要试剂和设备：DNA提取试剂购买于美国Invitrogen公司；Taq酶和缓冲液购买于日本TaKara；opction2荧光定量PCR购买于美国MJ公司；超速离心机购买于Eppendorf；细菌鉴定仪；所用的常规试剂均为分析纯，购买于国药化学试剂有限公司；方法，将标准菌株在XLD、三糖铁斜面和肉汤培养基上培养，从肉汤培养基中取一定量的菌液装入EP管中，离心，去上清，加入双蒸水，沸水浴、冰水浴，离心，取上清。食品样品采用沙门氏菌国标检测法（GB 4789.4-2010）中BPW前增菌之后的培养液装入EP管中，进行相同的操作。引物探针设计，在NCBI上搜索到目的基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象，然后用PrimerPremier5搜索引物和用Oligo验证评估引物。经过筛选进行特异性和灵敏度的实验。

表1　引物和探针序列