唐巍玲， 田苗苗， 黎健蓓， 钟　江

(复旦大学 生命科学学院 微生物学与微生物工程系 上海 200438)



昆虫细胞中共表达人糖基转移酶对重组蛋白SEAP表达的影响

唐巍玲， 田苗苗， 黎健蓓， 钟江

(复旦大学 生命科学学院 微生物学与微生物工程系 上海 200438)

杆状病毒-昆虫细胞表达系统有表达量高及蛋白翻译后修饰较完善等特点，但与哺乳动物相比其缺乏几种关键的糖基转移酶.许多研究表明将哺乳动物的糖基转移酶基因转入昆虫细胞中，能使得昆虫细胞表达蛋白的修饰得到有效改善.本研究通过RT-PCR克隆了人Ⅱ型N-乙酰葡萄糖胺转移酶(β-1,2-N-acetylglucosaminyltransferase Ⅱ)和Ⅰ型β-1,4-半乳糖基转移酶(β-1,4-galactosyltransferase)基因，并将它们分别插入重组杆状病毒上，获得了表达GnT2和β4GalT1的重组杆状病毒.以具有糖基化修饰位点的人分泌型碱性磷酸酶(Secreted Alkaline Phosphatase, SEAP)为对象，将表达糖基转移酶的重组杆状病毒和表达SEAP的重组杆状病毒共感染细胞，Western blot分析结果表明共感染时所表达的SEAP蛋白条带分子量明显大于其单独表达时的分子量.结果表明重组病毒共感染对杆状病毒-昆虫细胞表达的SEAP有修饰作用.

SEAP； 蛋白修饰； GnT2； β4GalT1； Bac-to-Bac

杆状病毒-昆虫细胞作为应用广泛的蛋白表达系统之一，具有安全、高效等优点.该表达系统拥有较完善的蛋白翻译后修饰途径[1]，但在蛋白质修饰方面，昆虫细胞与哺乳动物细胞有较大的差别.例如，由于缺乏几种关键的与蛋白糖基化相关的酶，其蛋白糖链为低甘露糖型，具有易使人产生过敏反应的α-1,3-岩藻糖核心且末端没有……